livin基因沉默对大肠癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响

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1、Livin基因沉默对大肠癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响：严红彭淑梅罗其泰邱春雷延卫东【摘要】目的观察沉默Livin基因对大肠癌HT-29细胞凋亡和化疗敏感性的影响。方法采用脂质体转染技术将化学合成的LivinsiRNA转入HT-29细胞，RT-PCR和TT检测各组细胞的增殖、流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果si-Livin1转染组LivinαmRNA、LivinβmRNA和Livin蛋白表达水平较其余干扰组和对照组显著降低(P<0.01)。5-FU对HT-29细胞的生长抑制作用强于si-Livin1转染组(P<0

2、.01)，而si-Li　　vin1+5-FU组对细胞的生长抑制率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01)。与空白对照组比较，si-Livin1转染可使细胞出现明显凋亡现象(P<0.01)，5-FU对细胞的促凋亡作用强于si-Livin1转染组(P<0.01)，si-Livin1+5-FU组的凋亡率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01)。结论siRNA沉默Livin基因能够抑制HT-29细胞的生长，促其凋亡，提高5-FU的化疗敏感性。

3、Livin基因有望成为大肠癌治疗的新靶点。【关键词】Livin;大肠癌;凋亡抑制蛋白;RNA干扰;细胞凋亡;化疗敏感性　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofLivingenesilencingonchemotherapeuticsensitivityandapoptosisofcolorectalcarcinomaHT-29cells.MethodsLivinspecificsiRNAoligonucleotidesaHT-29cellsbylipofectiontechnol

4、ogy.Transfectionefficiencyetry(FCM).ResultsparedRNAexpressionsofLivinαandLivinβotherapeuticsensitivityofHT-29cells.Livingenestandsachanceasaneatreatment.　　【Keya;Inhibitorofapoptosisproteins;RNAinterference;Apoptosis;Chemosensitivity　　目前认为细胞凋亡受到异常阻滞是恶性肿瘤发生、发展的重要因素

5、，肿瘤的化学药物治疗主要是通过诱导凋亡而发生效应〔1〕。Livin也称为KIAP，是2000年发现的凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的成员之一，对抑制细胞凋亡起着重要作用〔2〕。近年大肠癌的发病率逐年上升，治疗非常棘手，Livin为其基因治疗提供了一条新的途径〔3〕。本研究用基因克隆技术构建Livin靶向的小干扰RNA(siRNA)，并转染大肠癌HT-29细胞，　探讨Livin基因沉默后对大肠癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响。　　1材料与方法　　1.1材料大肠癌HT-29细胞株由南昌大学第一附属医院消化研究所提供，DMEM购自G

6、ibco公司，胎牛血清购自杭州四季青公司。武汉晶赛生物科技有限公司设计合成3条LivinsiRNA链、阴性对照链。转染试剂盒LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司。Trizol和PCR试剂购自天根生化科技公司。逆转录试剂购自Promega公司。兔抗人多克隆抗体Livin购自SantaCruz公司。用于-139317，No.NM-022161)，针对这2个异构体的共同部分设计3条序列。Livin1靶序列：5′-GGAAGAGACTTTGTCCACA-3′;Livin2靶序列：5′-CCGTGTC

7、CATCGTCTTTGT-3′;Livin3靶序列：5′-CTGGCCTCCTTCTATGACT-3′。另外设计阴性对照siRNA：5′-GACTTCATAAGGCGCATGC-3′。　　1.3细胞培养及细胞转染HT-29细胞用含10%胎牛血清、100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素的DMEM培养，细胞生长至80%时传代。转染前1d将对数生长期的细胞以5×104/孔接种于6孔板，细胞融合达50%时进行转染。用脂质体LipofectamineTM2000进行转染，以si-Livin1、si-Livin2、si-Liv

8、in3转染作为干扰组，以未转染组、阴性对照siRNA组、脂　　质体组作为无关干扰对照组，转染方式按LipofectamineTM2000说明书进行。　　1.4RT-PCR检测转染效果用Primer5.0软件设计引物，Livin的上游引物为5′CGCACGGCACAAAGACGA3′，下游引物为5′GTCAGTTCCT