Bax表达的影响-论文.pdf

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1、：ScienceandTechnologylnnovationHerald化学工业(顺)-3-(氯代亚甲基)-6-甲基一硫色满一4一酮对SMMC一7721~胞抑制作用及对Bcl一2／Bax表达的影响①郭园园’刘玉欣王艳平张学敏’(1．河北大学药学院河北保定071002；2．；"-I；ll：省药物质量分析控制重点实验室河北保定071002)摘要：目的初步探讨(顺)一3一(氯代亚甲基)-6-~基一硫色满一4一酮(CMMT)抗肿瘤作用机制。方法MTT法检测CMMT对SMMC-7721~胞抑制率，RT—PCR法检测

2、CMMT对Bcl-2、Bax、P53基因表达。结果CMMT能够明显抑制SMMC-7721~胞的生长，p53，Bcl一2和Bax分别是对照组的(2．46±O．129)，(1．39±O．08)和(0．36±o．049)倍。结论CMMT对SMMC-7721~胞有较好的抑制作用，通过下调Bcl一2的表达和促进Bax，p53基因的表达来诱导细胞死亡。关键词：(顺)-3-(氯代亚甲基)-6-甲基一硫色满-4-酮MTTRT-PCR，中图分类号：R965文献标识码：A文章编号：1674—098x(20l3)ll(a)一00

3、92-011材料与方法1．4数据处理与统计学分析7721细胞有很好的抑制作用。肿瘤发生是1．1药品与试剂数据用±s表示，进行统计学t检验。肿瘤细胞凋亡机制受到抑制的结果，在细DMEM一培养基、二甲基亚砜；新生牛尸<0．05差异具有统计学意义。胞凋亡中有许多因子参与凋亡的调控，其血清；MTT(Amersco)，RNA提取试剂盒、中Bcl一2家族是细胞凋亡的重要调控基因，cDNA合成试剂盒、SYBRMixture。2结果Bc1—2为抗凋亡基因，而Bax为促凋亡基1．2MTT法测定肿瘤生长抑制率2．1CMM的体外

4、抗肿瘤活性因，所翻译的蛋白Bax可以接受凋亡信号后细胞接种于96孔板。孵育l2h后CMMT对SMMC一772l细胞的抑发生寡聚化，促使线粒体内的凋亡因子释加药。实验设药物组(CMMT)、阳性对制率呈明显的浓度依赖性(图1)，随着放到线粒体外，引发细胞凋亡，而Bcl-2能照组(CDDP)、阴性对照组(DMs0)和浓度的增大，抑制率逐渐增大。当浓度为够与Bax形成异二聚体，而抑$1jBax的寡聚空白对照组，实验组药物设5个浓度梯80mol·L时，CMMT的抑制率在80％化来从而抑制细胞凋亡，p53是重要的肿瘤度

5、。培养24h后每孔加入10LMTT左右，且效果优于同浓度顺铂，结果表明抑制基因，能够抑制Bc1-2的表达同时促(5．0mg-mL)，继续培养4h，弃培养CMMT具有较好的抗肿瘤活性。进Bax的表达。本研究结果发现CMMT作液，每孔加入100“LDMS0，490nm处2．2CMMT对BcI-2．Bax，P53基因表达影用于细胞24h后，p53，Bax基因表达量升检测OD值。响高，而Bcl-2基因表达量下降，说明CMMT1．3荧光定量PCR检测CMMTmtBcl一2CMMT作用于SMMC一772l细胞可能是通过

6、下调Bc卜2和上调Bax，P53基Bax、P53基因表达影响24h后，RT—PCR检测Bc1-2、Bax、P53因的表达来诱导细胞死亡。取对数生长期细胞接培养皿，12h后基因表达，细胞经20¨mo1．LCMMT加入DMS0、CMMT(20umol·L)作用于处理后，P53，Bcl一2和Bax分别是对照参考文献24h，Trizol法提取总RNA，测定RNA组的(2．46±0．129)，(1．39土0．08)和[1】崔世怡，刘玉欣，杨更亮，等．新化合物浓度，制备cDNA模版。RT-PCR反应体(0．36±0．0

7、49)倍(图2)，说明CMMT可以(Z)-7-氟一6一甲基一3(哌嗪一1一亚甲系：2lcDNA模版，上、下游引物各1L，上调P53，Bax基因的表达，下调Bc1-2的表基)硫色满一4一酮体外抗肿瘤作用[J]．中SYBRMixture25uL，加去RNase水达。国药师，2010(13)．至50“L，混匀后进行以下反应：95度预变[2]胡颖，许凯黎．细胞凋亡机制研究的新进性l0min，95℃变性15s，58℃退火／延3讨论展[J】．肿瘤，20O1(21)．伸lmin，进行39个循环。MTT结果显示CMMT对S

8、MMC00口DMSO380702．56050三2兰4081．5302011O05Ol020408O102O0ConcentrationofCMMTuIIlop53Bcl一2Bax图1CMMT对SMMC-7721~1]]胞的抑制率图2CMMT对Bcl-2、Bax、P53基因表达影响①基金项目：河北省应用基础研究计划重点基础研究项目(1196641lD)。92科技创新导报ScienceandTechnologyinn