DIABLO表达的影响-论文.pdf

《DIABLO表达的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、·1874·中华实验外科杂志2014年9月第31卷第9期ChinJExpSurg，September2014，Vo1．31，No．9·卒申经夕卜科·B细胞淋巴瘤／白血病一2相关X蛋白基因过表达对人脑胶质瘤U251细胞株Smac／DIABLO表达的影响何运松赵洪洋项炜【摘要】目的观察B细胞淋巴瘤／白血病_2相关x蛋白(bax)基因过表达对人脑胶质瘤U251细胞第二线粒体来源的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂或低等电点的凋亡蛋白抑制剂家族直接结合蛋白(Smac／DIABLO)表达的影响，并探讨其机制。方法采用

2、脂质体Lipofectamine2000转染，将携带人bax基因的表达质粒转人人脑胶质瘤U251细胞株中，同时设转染pEGFP空载体和未转染的U251细胞为对照。用Westernblot法检测3组细胞中bax、Smac／DIABLO蛋白的表达，用免疫荧光法检测Smac／DIABLO蛋白在细胞中的分布。结果bax蛋白表达水平在转染外源性bax基因组为0．82±0．12，相较于未转染组(0．35±0．05)、转染pEGFP组(0．324-0．09)显著增高(P<0．05)。Smac／DIABLO蛋白表达在转染

3、bax组为1．094-0．16，相较于未转染组(0．62±0．10)、转染pEGFP组(0．70±0．20)表达上调(P<0．05)。bax、Smac在未转染和转染pEGFP细胞中表达差异无统计学意义(P>0．05)。免疫荧光显示Smac／DIABLO主要分布于胞质。结论外源性bax基因转入人脑胶质瘤细胞中并过表达，能够上调Smac／DIABLO蛋白表达。【关键词】胶质瘤；B细胞淋巴瘤／白血病-2相关x蛋白；第二线粒体来源的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂或低等电点的凋亡蛋白抑制剂家族直接结合蛋白Effe

4、ctsofBcelllymphoma／leukemia-2associatedXproteingeneover-expressiononexpressionofsecondmitochondria·derivedactivatorofcaspase／directIAP·bindingproteinwithlowplinhumanglioblastomaU251cellsHeYunsong，ZhaoHongyang，Xiang．DepartmentofNeurosurgery，UnionHospital，T

5、ongfiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，ChinaCorrespondingauthor：Xiang耽．Email：xiangwei20@hotmail．com【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofBcelllymphoma／leukemia-2associatedXprotein(bax)geneover—expressionontheexpressiono

6、fsecondmitochondria—derivedactivatorofcaspase(Smac)／directIAP—bindingproteinwithlowpI(DIABLO)inhumangliomacel11ine．MethodsTheplasmidofexpressionvectorpEGFP—baxwastransfectedintohumanglioblastomaU251cellswithlipofectamine2000．andmeanwhilethenon—transfected

7、cellsandthepEGFP—transfectedU251cellsweretakenascontrols．Cel—lularbaxandSmac／DIABLOexpressionwasdeterminedbyWesternbohting．CellulardistributionofSmac／DIABLOproteinwasevaluatedbyimmunofluorescence(IF)assaysandobservedunderinvertedfluores—cencemicroscope．Re

8、sultsThebaxproteinexpressionlevelinpEGFP—bax—transfeetedU251cellswas(0．824-0．12)，significantlyhigherthaninnon—transfectedgroup(0．35±0．05)andpEGFP—transfectedcontrolgroup(0．32±0．09，P<0．05)．TheexpressionlevelofSmac／DI