b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达对肺癌细胞顺铂耐药的影响-论文.pdf

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1、南京医科大学学报(自然科学版)第32卷第12期ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience)2012年12月miR．181a／b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达对肺癌细胞顺铂耐药的影响房栋，徐静，朱伟。，周鑫，张红光。，柬永前(t镇江市第二人民医院血液肿瘤科，江苏镇江212000；南京医科大学第一附属医院肿瘤科，江苏南京210029；镇江市第三人民医院肿瘤科．江苏镇江212000)[摘要]目的：研究miR．181a／b在肺癌细胞顺铂耐药形成中的作用。方法：运用

2、miRNA实时定量PCR方法检测miR一181a／b在肺癌顺铂耐药细胞A549／CDDP与母代A549细胞中的表达差异，运用Westernblot检测A549／CDDP细胞与母代细胞抗凋亡蛋白BCL2、MCL1和XIAP的表达差异，分别构建BCL2、MCL1和XIAP的3UTR荧光素酶报告质粒验证miR一181a／b的靶基因，在耐药细胞中瞬时转染miR18la／b模拟物以检测上调miR一181a／b对A549／CDDP细胞中BCL2、MCL1和XIAP蛋白表达及耐药性的影响，并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞

3、对CDDP(Cisplatin，顺铂)诱导凋亡的影响。结果：在A549／CDDP细胞中miR．181a／b均呈低表达，而抗凋亡蛋白BCL2、MCL1和XIAP则呈高表达，荧光素酶报告实验证实BCL2、MCL1和XIAP是直接受miR．181a／b调控的靶基因，在耐药细胞中上调miR一181a／b显著抑制BCL2、MCL1和XIAP蛋白表达水平，显著增加耐药细胞对顺铂的敏感性．并显著增加耐药细胞对顺铂诱导的凋亡。结论：miR．181a／b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达可显著增加A549／CDDP细胞对顺铂的敏感性。

4、[关键词]miR一181a／b；顺铂耐药；BCL2；MCL1；XIAP[中图分类号]R734．2[文献标识码]A[文章编号]1007—4368(2012)12—1690-06miR-181a／bmodulatescisplatinresistanceofhumanlungcancercellbytargetingmultipleanti-apoptosisgenesFANGDong，XUJing2,ZHUWei2,ZHUOXin2,ZHANGHong-guang。，SHUYong-qian(Departmen

5、tofHematologyandOncology，Zhent~iang2ndPeople’sHospital，Zhen~iang212000；2DepartmentofOncology，胁FirstAffiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029；~DepartmentofOncology，Zhengfiang3ndPeople’sHospital，Zhengfiang212000，China)[Abstract]Objective：Toinvestigatethepossible

6、roleofmiR一181a／binthedevelopmentofcisplatinresistanceinhumanlungcancercelllineA549／CDDP．Methods：Usingquantitativereal—timePCRanalysisformiRNAandWesternblottodetecttheexpressionofmiR一181a／bandanti-apoptoticproteinBCL2，MCL1andXIAPincisplatinresistanthumanlung

7、cancercelllineA549／cisplatin(CDDP)anditsparentalA549cell，respectively．Theluciferasereporterplasmidscarried3"-untranslatedregionofBCL2，MCL1andXIAPwereconstructedtotestifythetargetgenesofmiR一181a／b，respectively．UsingtransienttransfeetionofmiR一181a／btomimicthe

8、up-·regulationofmiR-181a／binA549／CDDPcellsandobservetheeffectofmiR·-181a／bontheexpressionlevelofBCL2，MCL1，XIAPandcisplatinresistancephenotype．UsingflowcytometrytodetectCDDP—inducedapoptosisoftheA549／CD