产甲酸草酸杆菌细胞数群体感应系统基因hdtS克隆和功能分析-论文.pdf

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1、第45卷第6期东北农业大学学报45(6)：49-562014年6月JournalofNortheastAgriculturalUniversityJune2014网络出版时间2014—6—1116：17：57【URL】http：／／www．enki．net／kcms／detail／23．1391．S．20140611．1617．017．html产甲酸草酸杆菌细胞数群体感应系统基因hdtS克隆和功能分析姜巨全，刘贺男，肖鸿禹，付晓薇，朱光宇(东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030)摘要：为鉴定产甲酸草酸杆茵(Oxalobacterfoig

2、enes)是否具有细胞数群体感应(Qs)系统，将费氏弧茵(Vibriofischeri)和荧光假单胞茵(eud0Ⅳn∞)Qs系统相关基因与产甲酸草酸杆菌(0．，0igenes)基因组序列进行比对，初步确定hdtS和AGPA为QS系统候选基因。通过PCR和T—A克隆方法分别克隆以上两个基因并将其构建成表达栽体pET19一hdtS和pET19一AGPA，借助SDS—PAGE凝胶电泳证实以上两个基因均在大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)中高效表达，采用平板菌株报告法鉴定hdtS具有酰基高丝氨酸内酯(AHL)合成酶的功能，而

3、AGPA则不具有该功能。这是国内外首次报道产甲酸草酸杆菌(0．fo，，)中Qs系统有关基因，对该菌株Qs系统了解及分析影响该茵株在人肠道内定殖因素具有重要意义。关键词：克隆；鉴定；产甲酸草酸杆菌；细胞数群体感应系统；hdtS；AGPA中图分类号：Q933；Q751文献标志码：A文章编号：1005—9369(2014)06—0049—08姜巨全，刘贺男，肖鸿禹，等．产甲酸草酸杆菌细胞数群体感应系统基因hdtS克隆和功能分析【J】．东北农业大学学报，2014，45(6)：49-56．JiangJuquan，LiuHenan，XiaoHongyu，

4、eta1．CloningandidentificationofhdtSgenefr0mOxalobacter~rmigenesencod-inganacylhomoserinelactonesynthaseofquomm-sensingsystem[J]．JournalofNo~heastAgriculturalUniversity,2014，45(6)：49-56．(inChinesewithEnglishabstract)CloningandidentificationofhdtSgenefrOmOxalobacterformigenes

5、encodinganacylhomoserinelactonesynthaseofquorum-sensingsystem／JtANGJuquan，LIUHenan，XIAOHongyu，FUXiaowei，ZHUGuangyu(SchoolofLifeSci-ences，No~heastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China)Abstract：Toidentifythequorum-sensingsystem(QS)genesinOxalobacter~rmigenes，QS-relatedgen

6、esfrom、／ibriofischeriandPseudomonasfluorenceswerealignedwiththegenomesequenceof0．formigenes．ThegeneshdfSandAGPAwerechosenasthecandidateQS．relatedgenes．clonedbyPCRjntothevectorpEASY-T3，andconstructedintopET19-pp-histag．TheresultingexpressionvectorsdesignatedpET19一hdtSandpET1

7、9-AGPAweretransformedintoEscherichiacoliBL21(DE3)，respectively，foIlowedbytheinductionbvlPTG．SDS．PAGEshowedthatthegeneshdtSandAGPAwereover-expressedinE．coliBL21(DE3)．ThehdtSgene，butAGPAnot，wasfinallyestablishedtoencodeanacyrIhomosednelactone(AHL)synthasev／aanAHLreporterstrai

8、n，AgrobacteriumtumefaciensNTIA(pzLFl4)throughthedouble．agardiflusionmethod．Tothebe