不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响-论文.pdf

《不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、江苏农业科学2014年第42卷第1期一55一李庆伟，梁明勤，樊亚敏，等．不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响[J]．江苏农业科学，2014，42(1)：55—58不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响李庆伟，梁明勤，樊亚敏，刘荣宁，贺爱利(河南农业职业学院现代农业工程系，河南郑州451450)摘要：以瓦松植株为外植体进行组织培养，探索不同取材时期、处理方法、消毒时间、激素配比等对其无菌体系建立的影响，结果表明，无菌体系建立的材料以5月上旬取材、取材后对材料进行假植处理、剪去新萌生的茎段作为外植体为宜；材料用0．1％的Hg

2、Cl2溶液消毒10min后接种，污染率在5％以下，存活率在92％以上；在MS+NAA0．1mL+6一BA0．5mg／L的启动培养基中，芽启动率为99．78％，外植体并没有出现愈伤组织、玻璃化等现象。关键词：瓦松；取材时期；处理方法；无菌体系中图分类号：Q945．52文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)01—0055—03瓦松(Orostachysfimbriatus)别称瓦花、瓦塔、瓦玉等，为景1．3材料培养天科瓦松属2年生草本肉质植物，在河南、江苏等省及朝鲜、初代培养基，以MS培养基为基本培养基，采用2因素完El本等国

3、家和地区有分布⋯。瓦松植株中含有多种酸类、景全随机设计(表1)。培养基采用高压蒸汽灭菌，在121oC、天庚酮糖苷及异丙叉基景天庚酮糖苷等物质，主要用于1．1ks／cm压力下灭菌15min。接种材料置于温度24—药物合成，目前，利用瓦松参与合成的药品不下27种。在临26℃、光照时间14h／d、光照强度30p~mol／(m·s)的条件床上，主要用于治疗宫颈糜烂、肾性皮肤瘙痒、痔疮、口腔溃疡下进行培养。等症状J。随着研究深入，以瓦松为原材料加工而成的药表1瓦松初代培养基的组合设计品，将更多地应用在临床上。自然条件下，瓦松生存完全依靠自生自灭。近

4、年来，由于受气候异常变化、花期采药、生境发生变化等影响，瓦松资源受到严重破坏，保护瓦松资源刻不容缓。目前，国内外并没有发现关于瓦松繁殖，尤其是快速繁殖的研究报道。探索并利用生物技术手段，对瓦松进行种苗繁育技术研究，对深度挖掘瓦松的潜在药用价值，进一步加快瓦1．4数据统计与分析松的开发利用具有十分重要的意义。接种后2d开始调查，后每隔3d调查1次，记载污染发生的时间、类型、部位，外植体受伤害情况，腋芽初始萌动时1材料与方法间、腋芽萌动程度、材料的生理状态等，接种后22d统计污染1．1试验材料情况，接种后30d统计材料存活、伤害情况、腋芽萌动

5、等。根供试材料采于当地农村15年以上的瓦房上，分别在2月据统计结果计算污染率、存活率、启动率等，公式如下：污染上旬、5月上旬、7月上旬、lO月上旬拔取全株瓦松，用带叶茎率：污染外植体数／接种总数×100％；存活率=存活个体数／段作为接种材料。接种总数×100％；启动率=萌芽个体数／接种总数×100％。1．2外植体消毒数据用SPSS13．0软件进行方差分析，采用邓肯氏新复采用2种外植体选择方法进行消毒。方法1为直接消毒极差测验进行多重比较。试验中全部处理小于1的百分数，接种：在自来水下清洗表面泥土与灰尘，后剪成3—5cm长茎经反正弦转换后，

6、进行分析和比较。段，用自来水冲洗30min，对2月上旬采集的材料，去根、留莲2结果与分析座状叶和芽，直接用水冲洗；置于超净工作台上用0．1％HgC1分别浸泡2、4、6、8、10、12、14rain，无菌水冲洗4次，沥2．1取材时期和方法对无菌体系建立的影响干水于无菌纸上。方法2为假植后消毒接种：材料假植于花由图1可见，瓦松取材时期和方法不同，组培苗污染率存盆中，套塑料袋，于室内25℃下培养5—7d；剪新萌生嫩茎直在很大差异；2月上旬取材后直接消毒接种(方法1)污染率接用0．1％HgC1消毒，消毒时间同上。最高，达100％，10月上旬、7月

7、上旬取材次之；5月上旬取材消毒后茎段，剪成带叶的茎段接种于初代培养基中，每瓶污染率最低，2种方法平均污染率22．2％。这可能是由于5接种1个茎段，每个处理均接种15瓶。月瓦松种子萌动后刚开始大量生长，生命力较旺盛，且外植体在空气中暴露时间较短，随着在空气中暴露时间的增加，外植体表面汇集大量微生物，组织培养时直接进行消毒，并不能将收稿日期：2013—05—09基金项目：河南农业职业学院重点项目(编号：HNAC2011KY002)。表面的微生物全部杀死；进入冬季，瓦松植株为适应环境条件作者简介：李庆伟(1979一)，男，河南封丘人，硕士，讲师

8、，研究方向为变化，进入休眠，整个植株生长停止，叶片紧紧闭合，体内积累种苗繁育与大蒜生产。E—mail：liqingwei2003@163．corn。大量微生物，消毒时，消毒剂只能将裸露在表面的