临床医学毕业论文存活素sirna表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响.doc

《临床医学毕业论文存活素sirna表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、XX大学毕业论文存活埶iRM表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响2014年6月25日存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响作者：李莉萍，罗超权，张志珍，梁念慈【摘要】H的探讨存活素siRNA表达质粒(mU6/stirvivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点，siRNA表达质粒mU6/survivin与化疗-药物顺钳、环磷酰胺、5氟尿n密喘或秋水仙碱合用

2、组对肿瘤细胞MCF7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异均有统计学意义(P0.01);对靶向DNA药物如顺钳、环磷酰胺和5氟丿求喀噪的抗癌性能具有显著的协同增强作用(二者合用效应Q值均1),但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用(Q值l)o结论在解除肿瘤细胞屮存活索功能的基础上进行药物化疗，可能是肿瘤治疗的一个新的可行方向。【关键词】存活素;siRNA;质粒;化疗药物Abstract:ObjectiveTostudytheinfluenceofsurvivinsiRNAexpressionplasmidon

3、antitumorroleofchemotherapeuticdrugs.MethodsThecombinedroleofmU6/survivinplasmidandseveralchemotherapeuticdrugsintheproliferationofMCF7cellswasdeterminedbyMTTmethod.ResultsThecombineduseofmU6/survivinplasmidandcisplatin,cyclophosphamide,5fluorouracilorco

4、lchicineresultedinsignificantinhibitionofMCF7cellscomparedwiththesingleuseofmU6/survivinplasmidorchemotherapeuticdrugs(P0.01).ThesynergisticeffectwasobservedinthecombinationofpmU6/survivinandcisplatin,cyclophosphamideand5fluorouracil(QI)otherthancolchici

5、ne(QI).ConclusionThecombinationofchemotherapyandsurvivindeprivalmaybeanovelregimenforcancerpatients.Keywords:surviving;siRNA;plasmid;chemotherapeuticdrug肿瘤手术切除结合化学药物的细胞毒性治疗仍然是当今肿瘤治疗的主要手段，顺钳、环磷酰胺、5氟尿U密噪(5Fu)和秋水仙碱都是广泛应用于临床实践的常规肿瘤化疗药物，但其药效并不总是理想，肿瘤治疗后伴随而来的耐

6、药或多纱耐纱性(MDR)更是治疗过程屮难以克服的障碍。存活素特杲性地表达于肿瘤细胞屮，临床数据显示，存活素表达高低与肿瘤患者的存活率相关［1］。我们针对存活素基因设计和克隆的mU6/SurvivinsiRNA表达质粒［2］,能高效地剔降乳腺癌MCF7细胞屮的存活索mRNA以及蛋白质的表达。木实验运用该质粒剔降乳腺癌细胞MCF7屮存活索的表达，之后施以化学毒性药物进行治疗，观察顺钳、环磷酰胺、5Fu和秋水仙碱在存活素被沉默之后的抗癌效果。1材料和方法1.1试剂空载体mU6pro由美国Michigan大学D

7、aveTurncr博士惠赠；ProFcction哺乳类转染系统购自Promega公司；5Fu(>99%)>环磷酰胺(>99%)>秋水仙碱(99.6%)购自南京学子医化研发屮心;顺钳注射液(1mg/mL)由江苏豪森药业股份有限公司生产;乳腺癌细胞MCF7为本科室保存。1.2细胞培养和转染MCF7细胞生长于含15%小牛血清、0.5U/mL胰岛索、100U/mL青霉100gg/mL链霉索的RPMI1640完全培养基屮，置37°C,5%CO2饱和湿度孵箱内孵育。细胞转染采用磷酸钙法，操作按ProFection哺

8、乳类转染系统(Promega)试剂盒说明书进行。pEGFPN1和mU6/survivin质粒以1:3的比例共转染MCF7细胞，在60mm培养Jill上转染3pgmU6/survivin质粒，荧光显微镜检测细胞表达绿色荧光蛋白EGFP的效率来确定转染效率均超过80%,空载体mU6pro转染细胞作为空白对照。1.3肿瘤化疗药物增敏性实验将细胞接种到60mm培养皿屮，转染mU6/survivin质粒或mU6pro空载体12h后，0.25%胰酶消化