存活素sirna表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响

《存活素sirna表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响：李莉萍，罗超权，张志珍，梁念慈【摘要】目的探讨存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点，siRNA表达质粒mU6/survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF7的细胞增殖抑制率均明显提高，差异均有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷

2、酰胺和5氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用(二者合用效应Q值均>1)，但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用(Q值<1)。结论在解除肿瘤细胞中存活素功能的基础上进行药物化疗，可能是肿瘤治疗的一个新的可行方向。【关键词】存活素;siRNA;质粒;化疗药物Abstract:ObjectiveTostudytheinfluenceofsurvivinsiRNAexpressionplasmidonantitumorroleofchemotherapeuticdrugs.MethodsThebinedroleofmU6/s

3、urvivinplasmidandseveralchemotherapeuticdrugsintheproliferationofMCF7cellsinedbyMTTmethod.ResultsThebineduseofmU6/survivinplasmidandcisplatin,cyclophosphamide,5fluorouracilorcolchicineresultedinsignificantinhibitionofMCF7cellsparedU6/survivinplasmidorchemotherapeuticd

4、rugs(P<0.01).ThesynergisticeffectU6/survivinandcisplatin,cyclophosphamideand5fluorouracil(Q>1)otherthancolchicine(Q<1).ConclusionThebinationofchemotherapyandsurvivindeprivalmaybeanovelregimenforcancerpatients.　　Keyid;chemotherapeuticdrug　　肿瘤手术切除结合化学药物的细胞毒性治疗仍然是

5、当今肿瘤治疗的主要手段，顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶(5Fu)和秋水仙碱都是广泛应用于临床实践的常规肿瘤化疗药物，但其药效并不总是理想，肿瘤治疗后伴随而来的耐药或多药耐药性(MDR)更是治疗过程中难以克服的障碍。存活素特异性地表达于肿瘤细胞中，临床数据显示，存活素表达高低与肿瘤患者的存活率相关[1]。我们针对存活素基因设计和克隆的mU6/SurvivinsiRNA表达质粒[2]，能高效地剔降乳腺癌MCF7细胞中的存活素mRNA以及蛋白质的表达。本实验运用该质粒剔降乳腺癌细胞MCF7中存活素的表达，之后施以化学毒性药物进行治疗，观察

6、顺铂、环磷酰胺、5Fu和秋水仙碱在存活素被沉默之后的抗癌效果。　　1材料和方法　　1.1试剂　　空载体mU6pro由美国Michigan大学DaveTurner博士惠赠;ProFection哺乳类转染系统购自Promega公司;5Fu(≥99%)、环磷酰胺(≥99%)、秋水仙碱(99.6%)购自南京学子医化研发中心;顺铂注射液(1mg/mL)由江苏豪森药业股份有限公司生产;乳腺癌细胞MCF7为本科室保存。　　1.2细胞培养和转染　　MCF7细胞生长于含15%小牛血清、0.5U/mL胰岛素、100U/mL青霉素、100μg/mL

7、链霉素的RPMI1640完全培养基中，置37℃，5%CO2饱和湿度孵箱内孵育。细胞转染采用磷酸钙法，操作按ProFection哺乳类转染系统(Promega)试剂盒说明书进行。pEGFPN1和mU6/survivin质粒以1∶3的比例共转染MCF7细胞，在60mm培养皿上转染3μgmU6/survivin质粒,荧光显微镜检测细胞表达绿色荧光蛋白EGFP的效率来确定转染效率均超过80%，空载体mU6pro转染细胞作为空白对照。　　1.3肿瘤化疗药物增敏性实验　　将细胞接种到60mm培养皿中，转染mU6/survivin质粒或mU6p

8、ro空载体12h后，0.25%胰酶消化，按0.5×104/孔接种于96孔板，在37℃、5%CO2下培养24h，分别加入DMSO或终浓度为10、20、40、80和160g/L的顺铂、环磷酰胺、5Fu、秋水仙