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时间:2020-04-06
《EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究作者:陆丽君,孟锐锋,国强,朱珊丽,张丽芳【摘要】冃的:制备高效价EB病毒膜蛋白抗体,并对其效价及其与EBV结合的特异性进行鉴定。方法:将B95-8细胞培养至3X105M时,超声破碎,纯化获得EB病毒膜蛋白抗原;EB病毒膜蛋白抗原经弗氏佐剂乳化,在家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共3次,并分别丁免疫前和每次免疫后1周取兔血清,检测兔免疫血清抗体IgG;进一步采用Westernblot检测制备的血清抗体与EBV结合的特异性,同时采用ELISA法检测兔血清抗体水平
2、及各周抗体滴度的变化趋势。结果:所有家兔在全程免疫后都产生了高效价膜蛋白的特异性抗体,最高滴度达1:6400。结论:用B95-8细胞制备的EB病毒膜蛋白抗原免疫家兔,可成功制备高效价的特异性血清抗体,为EB病毒膜蛋白抗原的免疫学检测奠定了基础。【关键词】EBV;抗体;免疫性Abstract:Objective:Topreparehigh~titerrabbitserumantibodyagainstEBVmembraneprotein.Methods:B95-8(EBV)cellswerecultivateda
3、ndproliferatedincellculturesystemwithRPMI-1640culturemediurn(withl0%FBSandPen/Strep)・Thereafter,thepurifiedB95~8(EBV)washarvestedusingsupercentrifugemethod.PrepareEBVmembraneproteincontainingFreundadjuvantbyroutinemethod・FouTrabbitswereimmimizedwiththeprepar
4、edantigenbysubcutaneousinjectionatv&rioussitesofskinonbackforeverytwoweeks,threetimesinal1・Theseraoftheseimmunizedrabbitswerecol1ectedseparatelyforpreparationoftherabbitserumlgG・SpecificbindingoftherabbitserumantibodyandtheEBVmenibraneproteinwereanalyzedbyWe
5、sternblotandthetiterwasassayedbyELISA・Results:Alloftheimmunizedrabbitsproducedhigh-titeTserumantibodyafteTthesecondbooster・ThehighesttiterofantibodyagainstEBVmembraneproteinwas1:6400.TheresultofWesternblotshowedtherabbitserumantibodycouldbindtotheEBVinembran
6、eproteinspecifical1y.Conclusion:ThespecificrabbitserumantibodyagainstEBVmembraneantigen,withhightiter,issuccessful1yprepared・TtlaidafoundationofdevelopmentofimmunologymethodfordetectionofEBVniembraneantigen.Keywords:EBV;antibody;immunityEB病毒(Epstein-Barrviru
7、s,EBV)是一含有包膜的DNA病毒,在人群中感染非常普遍,与某些肿瘤的发生和发展密切相关[1],如Burkitt's淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和成人T细胞淋巴瘤等,其中鼻咽癌在东南亚及我国南方地区高发;研究发现,EBV感染尚与胃癌、乳腺癌和肺癌等肿瘤的发病有一定的相关性[2-3]oEBV在感染机体时,可在宿主细胞膜上表达包膜糖蛋白及潜伏膜蛋白(latentmembraneprotein,LMP)等膜蛋白,可诱导机体产生特异性的免疫反应。因此,EBV膜蛋白是EBV病毒检测及其疫苗制备研究的靶抗原,是目前EBV研究
8、的前沿热点之一。为获得高效价的EBV膜蛋白抗体,本研究利用B95-8细胞制备EBV膜抗原,通过免疫家兔制备特异性免疫血清,并对其效价和与EBV结合的特异性进行了鉴定。1材料和方法1.1材料1.1.1细胞:B95-8为EB病毒转化的绒猴白细胞[4],购自上海中科院细胞库。1.1.2家兔:选择健康日本大耳白兔,雌性,体重1.8〜2.4kg,由温州医学院实验动物中心提供,动物批号:SCXK(
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