eb病毒检测与eb病毒感染诊断的研究

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　　EB病毒检测与EB病毒感染诊断的研究[]目的：探讨EB病毒检测在EBV感染诊断当中的临床意义。方法：使用酶联免疫吸附法及其荧光定量PCR方法同步检测76例疑诊EBV感染患儿住院时及起病1、3、6、9个月血浆当中EBVVCR-IgM及其外周血全血、单个核细胞当中EBVDNA，有效比较EBV感染患者病程当中4种检测方法的检出率。结果：在疑诊EBV的感染初期，全血及其PBMC当中ENVDNA阳性率比较高，与EBVVCR-IgM及其血浆EBVDNA相比较，会存在显著的差异性；在起病之后的1、3、6、9个月，4种检出的方法阳性率逐渐的降低，但是PBMC当中EBVDNA敏感性会高于其他的3种方法。结论：EBV感染的初期，通过检查，检测全血和PBMC当中EBVDNA是最为快速、敏感的检测方法；EBV可长期的存在于PBMC当中，通过荧光定量PCR方法检测外周血PBMC中EBVDNA对于EBV感染诊断有着非常重要的价值，能够作为判断疗效及其监测病情的重要手段。　　[关键词]EB病毒检测；EB病毒感染；研究 　　一般来讲，EB病毒是小儿感染性疾病非常常见的病原体，感染时的症状不一，主要表现为传染性单核细胞增多症。EBV还可能会扩散到全身的各个系统，很容易引起组织细胞增生症、吞噬细胞综合征等比较严重的疾病。文章主要研究EBV检测在EBV感染诊断当中的临床作用和意义。　　1资料与方法　　1.1资料　　选取了2008年7月至2010年7月收治的疑诊EBV感染患儿76例为研究对象，其中男40例，女36例，年龄一般在7个月到1.5岁，平均年龄是1.3岁。在进入医院时都属于出诊病例，入院前并没有进行过治疗。临床表现都有发热现象，有咽峡炎，免疫缺陷或者抑制的患儿不应该在研究的范围之内。　　1.2研究方法　　应该与患儿入院时及其发病1、3、6、9个月随访时，分别需要采血检测血清EBVVCA-IgM，全血、外周血单个核细胞EBVDNA。（1）抽取1ml外周血注入到干净的试管中，等自然凝固之后，进行低速离线，取血清1：10进行稀释，采用ELISA法检测血清的EBVVCA-IgM，此步操作需要严格按照试剂盒说明书进行。（2）取外周血3ml加入到EDTA抗凝管当中，1600g离线之后分离上层血液，用淋巴细胞分离也从全血当中分离出单个核心包，放在低温当中保存。每一例患儿都需要取50ul血浆、单个核细胞混悬液及其全血，利用全血基因组提取试剂盒抽取DNA，方法需要按照说明来做。（3）利用荧光定量PCR法扩增EBV基因，应用PTC-100TM型PCR仪器检测全血、血浆及其PBMCEBVDNA的含量。 　　2结果　　在疑诊EBV的感染初期，全血及其PBMC当中ENVDNA阳性率比较高，与EBVVCR-IgM及其血浆EBVDNA相比较，会存在显著的差异性；在起病之后的1、3、6、9个月，4种检出的方法阳性率逐渐的降低，但是PBMC当中EBVDNA敏感性会高于其他的3种方法。　　3讨论　　EBV是一种DNA病毒，广泛的存在于自然界当中，是一种普遍感染人类的病毒，具有着潜伏性。EBV感染是患儿长期发热的原因之一，感染后主要表现为传染性单核细胞增多症，一些患儿的病情得不到控制，感染会引发其他的恶性疾病。因此，早期诊断及其治疗显得十分的重要。 　　本文研究，PBMC和全血当中的EBV检出率明显高于血浆，但是PBMC和全血当中的EBV检出率却是基本一致。血浆EBVDNA监测主要是旨在检测游离在血浆当中的病毒，表示有病毒血症，不能够检测出血细胞当中细带的病毒，所以血浆EBVDNA阳性率要远低于全血及PBMC。PBMC主要指的是T细胞，同时也包括B、NK、单核细胞等等。EBV有着嗜B细胞的特性，经过研究证明，EBV除感染B细胞以外，同时还感染T细胞及其NK细胞，从而引起这些细胞的增值，导致了NK细胞功能受损等多种免疫缺陷。EBV感染一般只是侵犯体内淋巴系统，B细胞上部具有EBV受体，EBV在感染之后B细胞首先会受到累及，但是B细胞并没有复制的功能，主要成为了储藏库，之后T细胞产生了强烈的反应，导致了炎症介质的高水平分泌，出现了T细胞分化异常。　　EBV可持续感染单个核细胞，EBV感染患儿主要表现出多系统损伤可能会与PBMC当中的EBV感染有关系。EBV感染急性期治疗之后，虽然患儿的体温会降低至正常水平，临床的病症也基本消失，但是部分EBV感染细胞依然会逃避免疫监视并且建立起持续EBV感染的细胞库。EBV的长期存在会造成机体免疫功能的紊乱，与慢性感染状态的发展有着密切的关系。在一些EBV感染患儿的后期，血浆当中的EBVDNA呈现阴性，但是PBMC却是呈现阳性，这类患儿可能体内的病毒复制处在一个低谷阶段，血浆当中存在的EBV的量很低，病毒大多数是隐藏在细胞当中。PBMC当中的EBV可以作为潜在的病毒科，成为发生二次感染的病毒。因此，我们认为PBMC当中的EBV存在可能与病毒的传播有关，在临床治疗当中有效消除PBMC当中的EBV是一个非常重要的环节。　　总而言之，荧光定量PCR方法对于EBV感染的诊断有着非常重要的价值，可以作为监测病情的重要手段。