eb病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究

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1、EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究作者：陆丽君，孟锐锋，国强，朱珊丽，张丽芳【摘要】目的：制备高效价EB病毒膜蛋白抗体，并对其效价及其与EBV结合的特异性进行鉴定。方法：将B95-8细胞培养至3×105/mL时，超声破碎，纯化获得EB病毒膜蛋白抗原；EB病毒膜蛋白抗原经弗氏佐剂乳化，在家兔背部皮下多点免疫注射，间隔2周免疫，共3次，并分别于免疫前和每次免疫后1周取兔血清，检测兔免疫血清抗体IgG；进一步采用Westernblot检测制备的血清抗体与EBV结合的特异性，同时采用ELISA法检测兔血清抗体水平及各周抗体滴度的变化趋势。结果：所有家兔在全程免疫后都产生了高效价膜蛋白的特

2、异性抗体，最高滴度达1:6400。结论：用B95-8细胞制备的EB病毒膜蛋白抗原免疫家兔，可成功制备高效价的特异性血清抗体，为EB病毒膜蛋白抗原的免疫学检测奠定了基础。【关键词】EBV；抗体；免疫性Abstract:Objective:Topreparehigh-titerrabbitserumantibodyagainstEBVmembraneprotein.Methods:B95-8(EBV)cellswerecultivatedandproliferatedincellculturesystemwithRPMI-1640culturemedium(with10%FBSandPen/S

3、trep).12Thereafter，thepurifiedB95-8(EBV)washarvestedusingsupercentrifugemethod.PrepareEBVmembraneproteincontainingFreundadjuvantbyroutinemethod.Fourrabbitswereimmunizedwiththepreparedantigenbysubcutaneousinjectionatvarioussitesofskinonbackforeverytwoweeks，threetimesinall.Theseraoftheseimmunizedrab

4、bitswerecollectedseparatelyforpreparationoftherabbitserumIgG.SpecificbindingoftherabbitserumantibodyandtheEBVmembraneproteinwereanalyzedbyWesternblotandthetiterwasassayedbyELISA.Results:Alloftheimmunizedrabbitsproducedhigh-titerserumantibodyafterthesecondbooster.ThehighesttiterofantibodyagainstEBV

5、membraneproteinwas1:6400.TheresultofWesternblotshowedtherabbitserumantibodycouldbindtotheEBVmembraneproteinspecifically.Conclusion:ThespecificrabbitserumantibodyagainstEBVmembraneantigen，withhightiter，issuccessfullyprepared.ItlaidafoundationofdevelopmentofimmunologymethodfordetectionofEBVmembranea

6、ntigen.Keywords:EBV；antibody；immunityEB病毒（Epstein-Barr12virus，EBV）是一含有包膜的DNA病毒，在人群中感染非常普遍，与某些肿瘤的发生和发展密切相关[1]，如Burkitt’s淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和成人T细胞淋巴瘤等，其中鼻咽癌在东南亚及我国南方地区高发；研究发现，EBV感染尚与胃癌、乳腺癌和肺癌等肿瘤的发病有一定的相关性[2-3]。EBV在感染机体时，可在宿主细胞膜上表达包膜糖蛋白及潜伏膜蛋白（latentmembraneprotein，LMP）等膜蛋白，可诱导机体产生特异性的免疫反应。因此，EBV膜蛋白是EBV病毒检测及

7、其疫苗制备研究的靶抗原，是目前EBV研究的前沿热点之一。为获得高效价的EBV膜蛋白抗体，本研究利用B95-8细胞制备EBV膜抗原，通过免疫家兔制备特异性免疫血清，并对其效价和与EBV结合的特异性进行了鉴定。1材料和方法1.1材料1.1.1细胞：B95-8为EB病毒转化的绒猴白细胞[4]，购自上海中科院细胞库。1.1.2家兔：选择健康日本大耳白兔，雌性，体重1.8～2.4kg,由温州医学院实验动物中心提供，动物批号：SCX