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《临床医学毕业论文淫羊藿甙对小鼠t淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文2014年6月25日淫羊董貳对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响作者：滕菲，曾耀英*,黄秀艳，杨志，姚满林，宋兵，李林【摘要】F1的：研究淫羊董貳(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外屮期和晚期活化的影响。方法：采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测屮期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达；取屮期活化的细胞上清，利用LuminexTMlOO分析上清屮IL2、TL4、IL10、TNFa、IFN丫的含量变化。结果：ICA在终浓度0.3、1.5、3.0屮nol/L吋明显抑制CD25的表达而对CD7
2、1没有明显影响；下调Th2型细胞因子及上调Thl型细胞因子的分泌量，但没有剂量依赖效应。结论:ICA下调CD25、IL2和Th2型细胞因子水平，抑制T细胞活化，同吋有一定程度的促迸•细胞免疫反应,因此TCA可能具有双向调节免疫平衡的作用。【关键词】淫羊董貳;T淋巴细胞;CD25;CD71;流式细胞术淫羊蕾貳(Icariin,ICA)是屮药淫羊董的主要活性成分，它具有广泛的药理和生物活性作用［1］0张逸凡等［2］的研究表明：淫羊霍总黄酮对巴豆油所致小鼠耳肿胀及其他炎症有显著的抑制作用。刘铁汉等［3］利用放射免疫测定方法研究淫羊董貳及其肠菌代谢产物对炎症性细
3、胞I大I子(IL6、IL8、ILla、TNF丫等)均有特异的抑制作用。但在淫羊董貳对小鼠T淋巴细胞的活化以及细胞因子释放的影响方面的研究很少。木研究屮我们探讨了ICA对T淋巴细胞的屮期和晚期活化的作用，并检测了细胞因子水平。1材料和方法1.1材料清洁级BALB/cJ(H2Kd,IAd,以下简写为BALB/c)近交系小鼠，雄性，8〜10周龄，体质量18〜22g,购口广东省实验动物屮心。淫羊鶯貳(ICA)购自湖南九汇现代屮药有限公司；刀豆蛋白A(ConA).L谷氨酰胺（glutamine,Gin）、卩二銃基乙醇（2Mercaptoethanol）,均购美国S
4、igma公司；RPMI1640培养基、胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）为美国GibcoBRL公司产品；抗小鼠CD3FITC（fluoresceinisothiocyanate,异硫氧酸荧光索）、CD25PE（phycoerythrin,藻红蛋白）、CD71PE单克隆抗体（mAb）购口美国BDPharMingen公司。BeadlyteMouseMultiCytokineDetectionSystcm（IL2、IL4、IL10、TNFa、IFN丫）购自美国Upstatc公司。FACSCalibur流式细胞仪为美国BectonDickins
5、on公司产甜。LuminexTMIO0为XMAPTECHNOLOGY公司产品。1.2方法1.2.1小鼠淋巴细胞悬液的制备将BALB/cJ小鼠断髓处死，无菌分离小鼠颈部、双侧颌下、锁骨下、腋窝、腹股沟浅淋巴结及肠系膜淋巴结，在盛有预冷的PBS的无菌平皿屮，去掉被膜，200FI尼龙网过滤，收集细胞，用冷的PBS洗涤细胞2次（250g,5min）后，用PBS重悬，得到淋巴细胞悬液。1.2.2MTT法测定药物对T细胞毒性将121屮的淋巴细胞悬液用RPMI1640完全培养液（含100mL/LFBS.2mmol/LL谷氨酰胺、5gmol/L卩二毓基乙醇、1x105U
6、/L青霉素、100mg/L链霉索）洗涤2次（250g,5min）,重悬于RPMT1640完全培养液屮，吹匀并计数，调整细胞悬液密度为2X109/L,接种于96孔板，每孔190piLo实验共分6blank组（空白组,只加培养基），control组（对照组，只加细胞悬液），0.3pmol/LICA组,1.5pmol/LICA组，3.0gmol/LICA组,6.0gmol/LICA组。每孔定容至200pL体系。在37°C、50mL/LCO2培养箱培养24ho然后每孔加5mg/L的MTT各20gL,在培养箱屮避光染色4h后300g离心5min,将上清倒净，再每孔
7、加100pLDMSO,振荡器JL振荡10min,酶标仪490nm检测A值。计算药物对细胞的毒性可用以下公式：细胞存活率=［（药物组A值■空白组A值）/（对照组A值■空白组A值）］xl00%o1.2.3T细胞CD25表达测定采用直接免疫荧光标记法染色，接种方法同1.2.2o实验共分5组：对照组,ConA组,ConA+0.3pmol/LICA组,ConA+1.5gmol/LICA组,ConA+3.0gmol/LICA组。加设单加药1.5ymol/LICA组作为阴性对照。每孔定容至200pL体系。在37°050mL/LCO2培养箱预孵4h使药物充分作用，然后
8、加入刺激剂ConA（终浓度5mg/L）,在37°C、50mL/LCO2培养箱培养
