川芎嗪对t淋巴细胞活化增殖的影响论文

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1、川芎嗪对T淋巴细胞活化增殖的影响论文张涛赵蕊柳朝阳商宇王茉琳王小灵【摘要】目的观察川芎嗪(LTZ)对大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响。方法将指数生长大鼠脾淋巴细胞与不同浓度的LTZ共培养，用MTT法观察LTZ对大鼠T淋巴细胞的增殖作用。无菌分离大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞，以0.25、0.5、1mmol/LLTZ预培养60min后，分别加入刀豆蛋白(ConA)继续培养48h，以抗大鼠CD3和CD71单抗标记后，采用流式细胞术检测各组CD3+CD71+表达情况。结果不同浓度LTZ呈浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖；ConA刺激可显著升高CD3+CD71+表达(均P＜0.0

2、1)，1、0.5mmol/LLTZ可显著抑制ConA刺激下的CD3+CD71+表达(P＜0.01)0.25mmol/L作用逐渐减弱，呈一定的量效关系。结论LTZ可抑制T淋巴细胞活化和增殖.freela公司；环磷酰胺(cy)为上海华联制药公司产品；RPMI1640完全培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司；单克隆抗体antiratCD3异硫氰酸荧光素(FITC)、antiratCD71藻红蛋白(PE)均购自Pharmingen公司，为上海华联制药公司产品。1.2动物清洁级I1640培养液配成5×106ml细胞悬液，将大鼠脾细胞悬液(终浓度2.5×1

3、06ml)点于96孔培养板上,每孔100μl,再加入50μlConA及不同浓度LTZ药液，放入37℃、5%CO2孵箱中培养6h,每孔加入XTT20μl,培养6h,在酶标仪上以450nm测各孔A值,结果以增殖率表示。增殖率(%)=实验孔A值对照孔A值对照孔A值×100%。1.3.2T细胞CD71的表达大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞加ConA后分别培养20、24、48、72h后，加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10μL，避光放置30min，PBS洗涤后，40g/L多聚甲醛PBS固定,采用流式细胞仪检测CD3+CD71+表达

4、情况。取24孔培养板,每孔加大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞1ml(终浓度1×109/L),先加不同浓度LTZ预培养60min,PBS对照组加入相同容积的PBS；分别加入ConA(终浓度为10mg/L)，37℃、体积分数5%CO2条件下培养48h后加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10μl,避光放置30min；PBS洗涤后，40g/L多聚甲醛PBS固定，采用流式细胞仪检测各组CD3+CD71+表达情况。1.4统计学方法采用SPSS11.0统计软件，试验结果进行组间t检验。2结果2.1LTZ对T淋巴细胞的增殖作用LTZ在0.2

5、5～1mmol/L浓度范围内可浓度依赖性地对ConA所诱导的T淋巴细胞增殖发生抑制作用，具有量效关系，见表1。2.2ConA及LTZ对CD3+T淋巴细胞表达CD71的影响ConA刺激前CD3+T淋巴细胞CD71表达阳性率为（1.68±0.59)%，刺激20、24、48、72h后CD3+T淋巴细胞表达高水平CD71，其阳性率分别为（85.30±0.86）%、(85.96±1.20)%、(88.32±2.34)%、(99.45±3.13)%，其中20、24、48h呈一个平台期。应用1、0.5、0.25mmol/LLTZ对ConA刺激下CD3+CD71+表达有显著

6、抑制作用，其表达阳性率分别降至（30.26±1.62）%、（48.18±1.40）%、（72.18±2.43）%(均P＜0.01)，其中1、0.5mmol/LLTZ组与阳性对照组〔（2.70±0.05）%〕及PBS对照组〔（71.56±1.34）%〕比较有显著性差异(均P＜0.01)，且呈一定的量效关系。表1LTZ对T淋巴细胞的增殖作用3讨论一般认为T淋巴细胞(T细胞)在RA的发病中起着中心性的作用,.freelmol/L)呈浓度依赖性的对ConA所致的大鼠脾T淋巴细胞增殖发挥抑制作用。CD71是95kD的转铁蛋白受体,对于细胞增殖时铁离子的转运具有重要作用

7、〔5〕。ConA刺激20h，CD71表达可升高至75%以上，20、24、48h均保持在一个平台水平。由于细胞增殖对于铁离子的需求增加,因此ConA刺激20～72h可使转铁蛋白受体持续高表达。本研究显示，LTZ可显著下调CD3+CD71+的表达,提示LTZ可通过抑制T细胞上转铁蛋白减少铁离子的转运,从而影响细胞的增殖。另一方面,CD71也是细胞中晚期活化的标志,表达在大多数增殖的细胞上,包括活化的淋巴细胞、单核细胞和原始红细胞等,但不表达在休止期的淋巴细胞上〔5〕。综上所述，LTZ可显著抑制T细胞活化和增殖,其作用可能是通过下调T细胞转铁蛋白受体的表达,减少细

8、胞对铁离子的摄入实现的,确切机制有待进一步研究。【