非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变236例分析

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1、第２７卷第２期江苏大学学报（医学版）Ｖｏｌ．２７Ｎｏ．２２０１７年３月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ）Ｍａｒ．２０１７非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变２３６例分析张标，杨军（南京大学医学院附属鼓楼医院病理科，江苏南京２１０００８）［摘要］目的：探讨非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）基因突变率及突变分布。方法：采用ＰＣＲ直接测序法检测２３６例ＮＳＣＬＣ患者手术切除组织石蜡标本中ＥＧＦＲ基因突变状态，并分析其突变分布。结果：①入组２３６例

2、ＮＳＣＬＣ中，１２９例样本存在ＥＧＦＲ基因突变，总突变率为５４．７％。②在１２９例ＥＧＦＲ突变样本中，第１９外显子缺失突变５５例（４２．６％）、第２１外显子Ｌ８５８Ｒ点突变５１例（３９．５％）、第２０外显子插入突变９例（７．０％）、第１８外显子Ｇ７１９Ａ突变２例（１．６％）、少见突变３例（２．３％）和复杂突变９例（７．０％）。③ＥＧＦＲ突变热点为第１９和２１外显子上Ｅ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌ缺失突变和Ｌ８５８Ｒ点突变。④女性ＮＳＣＬＣ患者ＥＧＦＲ突变率（７４．８％，７７／１０３）明显高于男性患者（４８．６％，５２／１

3、３３；Ｐ＝０．００３）。腺癌ＥＧＦＲ突变率（６０．５％，１２１／２００）明显高于非腺癌（２２．２％，８／３６；Ｐ＝０．０１１）。结论：ＰＣＲ直接测序法能够有效检测ＮＳＣＬＣ中ＥＧＦＲ基因突变，尤其对于突变分型和未知突变。ＥＧＦＲ基因热点突变为第１９外显子Ｅ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌ缺失突变和第２１外显子Ｌ８５８Ｒ突变。女性、腺癌患者ＥＧＦＲ突变率高，非腺癌患者亦可能存在ＥＧＦＲ基因突变。［关键词］非小细胞肺癌；ＥＧＦＲ基因；突变；直接测序［中图分类号］Ｒ７３４．２［文献标志码］Ｂ［文章编号］１６７１－７７８３（２０１

4、７）０２－０１７９－０４ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１７００１７［引用格式］张标，杨军．非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变２３６例分析［Ｊ］．江苏大学学报（医学版），２０１７，２７（２）：１７９－１８２．肺癌是我国发病率最高的癌症，也是我国癌症性１３３例，女性１０３例，男女比例为１２９∶１００，发病［１］相关死亡的首要因素。非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）年龄３６～８４岁，中位年龄６２岁。组织分型：腺癌［２］约占肺癌的８０％，包括腺癌、鳞癌、腺鳞癌和大细２００例，鳞癌２９例，腺鳞癌５例

5、，大细胞癌２例。所胞癌等，约２／３的患者确诊时已属晚期，而化疗效果有患者手术前均未接受ＥＧＦＲＴＫＩｓ治疗。有限。表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）酪氨酸激酶抑１．２主要试剂和仪器制剂（ＴＫＩｓ）对伴有ＥＧＦＲ基因突变的晚期ＮＳＣＬＣ石蜡组织（ＦＦＰＥ）ＤＮＡ提取试剂盒（Ｄ３３９９０２）［３］疗效显著，且毒副作用较小。女性、亚裔、非吸烟购自美国ＯｍｅｇａＢｉｏＴｅｋ公司，Ｔａｑ酶（２０３２０５）购自腺癌患者是ＥＧＦＲ基因突变的优势人群，中国人德国Ｑｉａｇｅｎ公司，引物由上海Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成，ＥＧＦＲ突变

6、率为２７％～６６％，总体上高于西方人群琼脂糖购自宝生物工程（大连）有限公司，虾碱性磷［４－５］（１５％～２２％）。我国ＮＳＣＬＣ中ＥＧＦＲ基因突酸酶（ＳＡＰ）购自上海源奇生物医药科技有限公司，变的报道结果各异。本研究采用ＰＣＲ直接测序法测序试剂ＢｉｇＤｙｅＴｅｒｍｉｎａｔｏｒｖ３．１（４３３７４５５）、ＰＣＲ检测２３６例手术切除的ＮＳＣＬＣ样本ＥＧＦＲ基因突仪（ＡＢＩ２７２０）和基因分析仪（３５００Ｄｘ）均为美国Ａｐ变情况，以进一步总结我国ＮＳＣＬＣ中ＥＧＦＲ基因突ｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司产品。变频

7、率、基因突变分布及其临床病理特征，以期为１．３基因组ＤＮＡ提取ＮＳＣＬＣ的靶向治疗提供依据。由病理医师选取肿瘤细胞丰富的蜡块，切片并病理质控，保证受检区域肿瘤细胞比例不低于１材料与方法５０％，刮取肿瘤组织至ＥＰ管，按照石蜡组织ＤＮＡ１．１研究对象提取试剂盒说明书提取基因组ＤＮＡ。收集南京大学医学院附属鼓楼医院病理科１．４ＰＣＲ直接测序和ＥＧＦＲ基因突变分析２０１１年１月至２０１５年３月确诊并进行ＥＧＦＲ基因设计ＥＧＦＲ第１８－２１外显子特异性引物，引物突变检测的ＮＳＣＬＣ手术切除样本２３６例。其中男序列如下，第１

8、８外显子上游：５′ＴＣＣＡＡＡＴＧＡＧＣＴＧ：通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｊｏｈｎ５３２８＠１６３．ｃｏｍ１８０江苏大学学报（医学版）第２７卷ＧＣＡＡＧＴＧ３′，下游：５′ＴＣＣＣＡＡＡＣＡＣＴＣＡＧＴＧＡＡＡ表１ＥＧＦＲ基因第１９外显子缺失突变类型ＣＡＡＡ３′；第１９外显子上游：５′ＧＴＧＣＡＴＣＧＣＴＧＧ突变类型例数百分比（％）ＴＡＡＣＡＴ