盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定.pdf

《盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、食品研究与开发２０15年3月检测分析ＦoodResearchAndDevelopment第36卷第6期97DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.06.028盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定黄晨，吴冬雪，王禹，张俊哲，柴铭骏，董志珍，赵祥平（天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津300461）摘要：选取辣根过氧化物为抗原标记酶，采用重氮化法将盐酸克伦特罗CLEN分别与牛血清蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）偶联，合成包被抗原和免疫原，并通过紫外光谱扫描（UV）、SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳法验证偶联成功。这为下一步获得针对盐酸克伦特

2、罗类特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。关键词：盐酸克伦特罗；重氮化法；ELISASynthesisandIdentificationofImmunogenClenbuterolHUANGChen，WUDong-xue，WANGYu，ZHANGJun-zhe，CHAIMing-jun，DONGZhi-zhen，ZHAOXiang-ping（Animal&Plant&FoodstuffsInspectionCenter，TianjinImport&ExportInspectionandQuarantineBureau，Tianjin3004

3、61，China）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Clenbuterol（CLEN）whichwasconjugatedbyhorseradishperoxidase（HRP）wasboundtobovineserumalbumin（BSA）andovalbumin（OVA）respectivelybyusingdiazotization，whichaimedtosynthesizeartificialimmunogenicantigenCLEN-BSAandartificialdetectionantigenCLEN-OVA.TheresultsofUVscan，SDS-PA

4、GEindicatedthattheartificialBSAandartificialdetectionantigenCLEN-OVAweresynthesizedsuccessfully.TheresultsdemonstratedthattheCLEN-BSAconjugatehasimmunogenicitywhichisgoodfornextmonoclonalantibodypreparationandtheresearchofELISAkit.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：clenbuterolhydrochloride；diazotion；ELISA盐酸克伦特

5、罗（clenbuterol，CLEN）俗称瘦肉精，化中将盐酸克伦特罗列为违禁药品。CLEN在我国的非学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是β-肾上腺素受体激动法使用屡禁不绝，从2000年~2001年浙江和广东等地剂（简称β-激动剂）的一种，曾作为生长促进剂在畜牧有近2000多人因食用含有CLEN残留的动物性食品业中应用，长期使用后，在动物体内形成积累性残而出现中毒，这不仅直接影响了我国在畜产品上出口[1]留，人食用残留该物的肉品就会引起神经过敏、心跳的竞争力，而且也严重威胁到人民的健康安全。建立[2]过速等急性中毒症状，因此该药物被我国明令禁止有效的残留监督检测体系、提高人

6、们对CLEN中毒危[3]使用。但因其能有效地促进蛋白质合成和肌肉组织害的认识是治理其非法使用的有效措施。为了配合、生长，减少脂肪尤其是皮下脂肪的沉积，降低胴体脂贯彻执行我国政府的禁令，深入了解盐酸克伦特罗在[4]肪含量，提高瘦肉率和饲料转化率，具有一定的经济动物体内的代谢、吸收、残留消除特点及其检测方法效益。因此，一些不法分子不顾消费者的健康安全，仍具有重要意义。[5]将其利用于畜牧生产中。我国农业部1997年3月[农目前，针对盐酸克伦特罗的检测方法主要有化学牧发（1997）]3号文严令禁止β-激动剂在动物生产中分析法、色谱技术、毛细管电泳、免疫分析技术和生物[6

7、]的应用，农业部176号公告《禁止在饲料和动物饮水中传感器技术。盐酸克伦特罗是一种半抗原，只有通过使用的药物品种目录》规定了β-激动剂类不能在饲料和其他分子量较大的载体蛋白偶联以后才能作为免和饮水中使用，中华人民共和国农业部第193号公告疫原，并借助载体蛋白的T细胞表位产生特异性抗作者简介：黄晨（1983—），女（汉），兽医师，硕士研究生，研究方向：体，所以盐酸克伦特罗人工抗原合成是ELISA检测技[7]食品安全。术的关键。黄晨，等：盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定检测分析981材料与方法CH3ClCH3ClNaNO·2HCl+-1.1仪器与试剂H3CCNH-CH

8、2-CHN