刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化动物模型的建立及机制探讨-论文.pdf

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1、·258·ChineseHepatology，Apr．2012，Vo1．17，No．4·临床与基础研究·刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化动物模型的建立及机制探讨陈丽谭友文叶云孙莉【摘要】目的利用刀豆蛋白A建立昆明小鼠的肝纤维化模型并探讨其机制。方法昆明小鼠210只，随机分为7组，正常对照A组，用刀豆蛋白A10mg每周1～3次(分别为B、C、D组)15mg每周1～2次(分别为E、F组)、20mg每周1次(G组)的不同剂量和不同注射次数，采用尾静脉注射方法攻击昆明小鼠，分别在第1周、第5周、第12周和第20周处死3只小鼠，留取肝组织标本行苏木素一伊红染色、Mas

2、son纤维染色，并行KnodellHAI和Ishak肝纤维化半定量计分，最后一次留取血清标本，检测IL-18、TNF-a和IFN一7。结果刀豆蛋白A15mg每周1次，10mg每周2次组提示实验早期肝组织以坏死为主；实验中期(5～12周)坏死减轻，细小纤维条索出现；实验晚期(20周)纤维间隔逐渐增宽。10mg每周1次组实验晚期(20周)纤维条索形成，纤维间隔有增宽趋势。10mg每周3次组和20mg每周1次组全部死亡前，未发现有明显的肝纤维化形成。肝组织炎症活动度半定量计分显示刀豆蛋白A注射次数和注射剂量较大组评分较高(P<0．05)。肝纤维化半定量计分显

3、示10mg每周2次组较15mg每周1次、10mg每周1次组高(P

4、g组每周1次为G组扎和注射动物血清等方法造成_1。]。但这些模型并不适30只。采用尾静脉穿刺注射刀豆蛋白，共20周。正用于人类肝纤维化的模型要求，因其形成均未涉及到免常对照组注射等量生理盐水。每组分别于第1、5、12疫病理损伤或免疫损伤过程与人类相差甚远。近年来，和20周末注射后24h，每次随机选取3只小鼠，眼眶有人发现刀豆蛋白A(ConA)可以造成肝细胞损伤J，采血法留取血清并处死小鼠，取出肝组织，一部分用且证实这种损伤的机制是T细胞介导的，与人类病毒10甲醛溶液固定，用于HE染色和Masson染色。四、肝组织染色性肝炎的免疫病理机制非常相似。又有学

5、者利用ConA成功建立了肝纤维化模型L5]。本研究在昆明小鼠成功采用苏木素一伊红染色、Masson纤维染色常规方法进行。建立肝纤维化模型，并对其发病机制进行探讨。五、小鼠血清TNF—a、IFN一、IL一18ELISA检测材料与方法参照有关说明进行。六、统计学处理一、实验动物使用SPSS12．0统计软件包进行统计分析，数据昆明小鼠210只，6～8周龄，体质量18～22g，组间比较采用方差分析。购自苏州大学实验动物中心。所有小鼠饲养于苏州大学动物房，22℃，55相对湿度，12h昼夜节律，自结果由进食、饮水。适应环境1周后开始实验。一、各组一般情况及死亡数观

6、察二、主要试剂正常对照组完成实验小鼠无死亡，发育良好，活ConA，小鼠IL一18、TNF—a、IFN一ELISA检i贝0试泼好动。10mg每周1、2次组，15mg每周1次组完剂盒均为Sigma公司产品。成实验，死亡率分别为7／18(38．9)，14／18三、动物分组(77．8)，11／18(61．1)；10mg每周3次组在实验昆明小鼠随机分为7组，正常对照组A组30只；中期全部死亡，15mg每周2次和20mg每周1次组10mg组，又分每周1次B组30只；每周2次c组30基金项目：江苏镇江市社会发展项目(2006047)作者单位：212000江苏镇江市第

7、三人民医院肝炎科通信作者：谭友文，Email：tyw915@sina．comChineseHepatology，Apr．2012，Vo1．17，No．4·260·表1各组小鼠KnodellHAI计分注：与正常组比较，q值12．87～138．28，P

8、fanumericalscoringsystemforassessinghistolgical