酒精联合高脂饮食诱导小鼠脂肪肝模型的建立及发病机制探讨

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1、授予单位代码10089学号或申请号12074HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位酒精联合高脂饮食诱导小鼠脂肪肝模型的建立及发病机制探讨学位申请人：崔庆飞导师：刘月平教授王小玲教授专业：病理学与病理生理学2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所

2、有。否则，承担相应法律责任。研究生签名:Z�级学隨导盖章：lt年r月？。曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：像^>巧导师签章：A年_r月中文摘要英文摘要英文缩写研究论文酒精联合高脂饮食诱导小鼠脂肪肝模型的建立及发病机制探讨刖5、/•>.材料与方法觀ITO附表讨论结论参考文献综述脂肪肝动物模型的研究进展致谢+入簡中文摘要酒精联合高脂饮食诱导小鼠脂肪肝模型的建立及发病机制探讨摘要目的：

3、建立一种与人类脂肪肝发生发展进程类似的小鼠脂肪肝模型，并借此来探讨高脂饮食同时饮酒对肝脏可能的损伤途径以及脂肪肝与胰岛素抵抗之间的关系，为临床研究提供实验依据。方法：C57BL/6J小鼠120只，SPF级，体重18~22g，雌雄各半，随机分为两组：对照组（Con）、模型组（Mod）各60只，雌雄各半。对照组动物自由饮水，给予基础饲料，热量组成：碳水化合物71%，脂肪8%,，蛋白质21%，总热量为260kcal/100g；模型组动物自由饮用20%乙醇溶液，饲喂高脂饲料，热量组成：碳水化合物20%，脂肪59%，蛋白质21%，总热量为540kcal/100g。分别于喂养1周、2周、4

4、周、7周后每组随机选10只小鼠，雌雄各半，动态观察其肝脏形态学改变，第7周形态学证据显示模型组动物脂肪变性程度达到脂肪肝的标准时，立即将剩余全部小鼠禁食12小时，称重后从小鼠眶后静脉丛采血，用于测定空腹血清胰岛素及血清ALT、AST、TBA、TG、CHO、TBIL、ALP、GLU、FFA。然后处死小鼠，立刻取出肝脏组织，大体观察、称重后迅速分离并截取约合适大小的肝右叶标本放入2.5％戊二醛固定液中固定，4℃保存，用以在透射电镜下观察肝脏超微结构的改变；然后将肝中叶新鲜组织用OCT包埋剂包埋，-20℃冰箱保存，用以肝组织切片油红O染色；肝左叶放入10%中性福尔马林固定；其余肝组织

5、液氮冷冻后置-80℃超低温冰箱保存，用于检测肝组织TG、T-SOD、MDA、ADH、ALDH、T-AOC。结果：1在建模第6周和第7周期间，分别各有1只实验动物死亡。2肝组织HE染色结果表明，建模2周后，模型组动物肝细胞开始出现轻度脂肪变，随着建模时间增长，脂肪变性严重程度逐渐加重，7周后部分动物的肝细胞出现弥漫性大泡性肝细胞脂肪变性，脂肪变肝细胞占肝小叶的1/3以上，达到脂肪肝标准；模型组动物肝细胞还可见不同程度的肝细胞坏死现象，对照组动物肝细胞未见明显脂肪变性。3肝组织油红O染色结果显示，随建模时间延长，模型组动物肝细胞1中文摘要胞浆内的红色脂滴逐渐增多，到第7周时，肝细胞

6、浆内可见大量红色脂滴，肝细胞肿大，符合肝细胞内脂质沉积的特征。对照组动物肝脏中脂滴含量明显少于模型组。4建模7周后，与对照组相比，模型组雄性动物体重增加4.20%（P<0.05），肝重增加6.36%（P<0.05），肝重系数无明显增加（无统计学差异）；雌性动物体重增加8.29%（P<0.01），肝重增加10.23%（P＜0.01），肝重系数增加不明显（无统计学差异）。5建模7周后，与对照组相比，模型组动物血清ALT水平上升一倍，AST水平上升81%，TBA水平上升108%，TG水平上升57%，CHO水平上升27%（均为P＜0.01）；模型组动物血清TBIL、ALP、GLU、FF

7、A水平与对照组相比无明显差别。6建模7周后，与对照组相比，模型组动物肝脏TG上升27%（P＜0.05），MDA水平上升53%（P＜0.01），T-AOC下降35%（P＜0.01）；模型组动物肝脏ADH、T-SOD、ALDH水平与对照组相比无明显差别。7建模7周后，与对照组相比，模型组动物空腹血糖水平略有上升（无统计学差异），空腹胰岛素水平和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显著上升（P＜0.01）。8建模7周后，肝组织电镜结果显示模型组动物肝细胞胞浆疏松；细胞核边缘不规则、不清晰，核仁不明显，