大豆子叶节再生体系的建立-论文.pdf

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1、2013．6作物杂志Crops大豆子叶节再生体系的建立刘思言高玮夏海丰姚丹关淑艳金慧卿曲静王丕武(吉林农业大学生命科学学院，130118，吉林长春；通化市农业科学研究院，135007，吉林梅河口3吉林农业大学农学院，130118，吉林长春)摘要以吉农28、吉农27、吉农17三个基方便、不受季节限制、诱导率高、生长快、不易发生因型大豆子叶节作为外植体，采用正交实验设计变异、再生植株健壮易成活等优点，尽管以子叶节方法，对大豆的基因型和子叶节再生中植物生长再生体系也存在诸如丛生芽的相互抑制、不易伸调节剂浓度进行了研究。结果表明

2、：适合大豆子长、再生困难、转化时会出现嵌合体，但目前仍被叶节不定芽诱导的基因型是吉农27，最佳诱导培认为是用于大豆遗传转化的比较理想的外植体。养基是MS+6-BA3．0mg／L-I-IBA0mg／L+2，4．D本试验以大豆子叶节为外植体，研究不同的植物OmdE。适合大豆子叶节不定芽继代的基因型是生长调节剂和大豆的不同基因型对大豆子叶节不吉农17，最佳继代培养基是MS+6．BA1．0mg／L+定芽的诱导、继代、增殖的影响，找出不同阶段的IBA0．1mg／L。适合大豆子叶节不定芽增殖的最最适基因型和植物生长调节剂浓度，旨在建

3、立稳佳基因型是吉农27，最佳增殖培养基是MS+6一BA定、高效的大豆遗传转化受体系统，为大豆的转基1．0mg／L+NAA0．1mg／L+GA1．0mg／L。因研究奠定基础。关键词大豆；子叶节；再生体系1材料与方法大豆是世界最主要的油料作物以及高蛋白粮1．1供试材料饲兼用作物，发展大豆生产对改善人民的食物结本实验所用的3个大豆品种分别为吉农28、构、满足植物蛋白、油脂需求、发展畜牧业和食品吉农27、吉农17，均由吉林农业大学生物技术中工业都有重要的意义，20世纪80年代末，心提供。Hinehee等和McCabe等第一次获得

4、了转基因1．2实验方法1．2．1无菌实生苗的获得挑选色泽鲜亮、粒大豆植株，从此以后有越来越多的科研人员和越大、饱满、种皮无破损、无霉病斑的大豆种子，用来越多的实验室开始从事大豆的转基因技术研75％酒精消毒30s，用0．1％HgC12溶液中浸泡究，2012年全球转基因大豆的种植面积达到1．0910min，再用无菌水冲洗4～5次，然后将3种种子亿hm，发展转基因大豆产业具有良好前景。接种于MS培养基上，按以下条件培养：温度27±目前，大豆的遗传转化中亟待解决的首要问1℃；光照12h，黑暗12h。5d后取鲜绿的子叶节处题是要建

5、立一个高效的转化再生体系。常见的再膨大的大豆无菌苗，在子叶节下3～4mm处切去下生体系包括愈伤组织再生体系、原生质体再生体胚轴，纵向切开子叶，横向切去1／3，切除顶芽和腋系、子叶节再生体系和胚尖再生体系等。近芽，每粒种子获得两个子叶节外植体。年来，研究和应用比较多的是子叶节再生体系和1．2．2不定芽的诱导将子叶节接种于激素浓胚尖再生体系卜。子叶节再生体系具有取材度不同的不定芽诱导培养基上，以MS培养基为基作者简介：刘思言，副教授，主要从事作物生物技术研究本培养基，每个处理3瓶，每瓶3个外植体。13d王丕武为通信作者，教授

6、，主要从事作物生物技术及作物遗传育种研究后统计每个外植体诱导形成的芽数，找出大豆子基金项目：吉林农业大学科研启动基金(201242)；吉林省科技厅科叶节的最佳诱导培养基。本实验采用四因素三水技发展计划项目(201101111)；吉林省教育厅科学技术研究资助项目(2011—41)；吉林省科技厅项目平的L9(3)正交设计，共9组处理，如表1。(20120215)；吉林省科技厅成果转化补助项目1．2．3不定芽的继代培养接种14d后，将三个(20095044)收稿日期：2013—08—09；修回日期：2013—10—08基因型大

7、豆子叶节不定芽从外植体上切下，接种42作物杂志Crops2013．6表1大豆子叶节不定芽诱导实验因素水平表同的培养基上，13d后进行记录，结果见表4，彩插3图版I。由K值综合分析可以确定，最优组合是A2B3c1D1，即吉农27，3．0mg／L的6-BA，0mg／L的IBA，0mg／L的2，4-D组合在一起。根据极差R值的大小确定4个因素对大豆子叶节不定芽诱导影响的主次顺序依次为D>B>C>A，即2，4．D的影响最大，其次是6-BA、IBA，基因型的影响最小。表4不同条件下大豆子叶节不定芽诱导正交试验方案及结果分析于激素浓

8、度不同的继代培养基中进行培养。本实验采用三因素三水平正交设计，共9组处理，如表2。表2大豆子叶节不定芽继代培养实验因素水平表1．2．4不定芽的增殖培养继代27d后，将不定芽转入激素浓度不同的增殖培养基中培养，找出最佳增殖培养基。本实验采用四因素三水平正交2．2不定芽的继代培养设计，共9组处理，如表3。将诱导产生的不定