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1、大豆论文：改良的大豆子叶节转基因方法【中文摘要】随着基因工程技术的发展,采用遗传转化导入外源基因,改善大豆品质及抗病抗逆性,已成为大豆改良的重要方法之一。本文从多个层面对转基因方法的原理和进展作了详细综述,最终选取相对高效的农杆菌介导法作为大豆转基因的基础研究方法,并从种子消毒,外植体选择,农杆菌侵染和共培养,以及各培养时期植物激素种类和浓度等方面作了分析研究,以探讨大豆转基因优化研究步骤,以期在一定程度上达到提高转基因效率的。文章以苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)毒性蛋白基
2、因Bt为基因,先研究未进行转染时期11种不同硼酸浓度处理对大豆子叶节丛生芽再生的影响,再从中选取代表性的硼酸浓度处理诱导期转染的大豆,观察三种硼酸浓度对大豆再生丛生芽转基因的影响,结果表明不加入硼酸时表现为严重缺硼症状,不仅生长点没有长出,而且根的生长也受到严重抑制。结果表明高浓度硼酸有较多的愈伤组织形成,外植体短期内容易死亡,不利于转基因丛生芽的再生。适宜浓度硼酸培养基诱导的大豆丛生芽长势最好,而且转基因效率也高达3.3%。对大豆抗性幼苗的根和叶片分别采用PCR、逆转录PCR和Southernblot
3、ting等方法进行筛选与鉴定,结果均获得阳性幼苗,证明外源基因已经成功转入大豆基因组中。【英文摘要】Plantgeneticengineeringtechniqueshaveunprecedentedpotentialforcropimprovement.Thetechniqueofgenetictransformationhasbeenappliedintheimprovementofseedqualityanddiseaseresistanceinsoybean.Basedontheprincipl
4、eandadvatagesoftransgenetictechnologytheagrobacterium-mediatedtechniquewaseventuallychosedasthebasictransformationmethod.Sterileseedling,explantchoice,agrobacteriuminfectionandcoincubation,andconcentrationofplanthormoneduringthetrainingperiodweretriedint
5、heinvestigationofplantregeneration,inordertooptimizethemediumforregenerationandgreatlyimprovethetransgenicefficiency.Theagrobacterium-mediatedtransgenictechniquecombinedwiththetreatmentofboricacidwasstudiedforthetransformationofforeigngeneBttoexplant,soy
6、beancotyledonnodes.11differentboricacidconcentrationprocessingmultipleshootofsoybeancotyledonssectionwerechosen,thentransfomedsoybeansduringtheinductionperiodweretreatedseperatelybytheconcentrationoftypicalboricacid.Theresultsshowedthatthetransformations
7、eedlingswithoutboricacidhadnogrowingpoint,andtherootsgrowthwerealsoseverelyrestrained.Atthesametime,thehighboricacidconcentrationgrowedmorecallus,theexplantsshort-termeasilydied,whichwerenotconducivetotheregenerationoftransformedmultipleshoots.However,th
8、eshootsregeneratedfromtheexplantsweremultipliedbestatappropriateboricacidconcentration,andthetransformationratioreached3.3%.RegeneratedseedlingwerescreenedbygenomicPCRamplificationandresistantseedlingsoninductivemediumwaso
