大豆子叶节高效再生体系的建立与gmcoi1基因的遗传转化

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1、大豆子叶节高效再生体系的建立与GmC优j基因的遗传转化摘要大豆是一种重要的油料作物，是植物蛋白及油脂的重要来源，又是工业原料和牲畜家禽的重要饲料，在我国广泛种植。通过基因工程的方法对大豆进行有目的改良，是一种较常规育种更为有效、快速的方法。但大豆较其它作物在遗传转化操作技术的某些方面的难度大一些，建立理想的、高效的大豆转化体系，仍是国内外学者们的研究热点之一。本研究以5个大豆品种为材料，研究了种子萌发天数、外植体大小、萌发培养基、诱导培养基、激素浓度对大豆子叶节再生的影响，以求建立一个大豆子叶节

2、高效再生体系用于大豆的遗传转化。结果表明，大豆种子萌发天数对丛生芽分化有影响，以萌发5—7天为宜；予叶节外植体大小以保留全部子叶为宜；不同基因型品种对萌发培养基、诱导培养基要求不同，台湾292的最佳萌发培养基为1／2Ms+1Ing，L6一BA，而鄂8157、湘春豆18号、湘春豆13号、湘春豆15号的最佳萌发培养基为l，2Ms+2mg几6一BA，台湾292、鄂8157、湘春豆15号的最佳诱导培养基为Ms+2mg／L6一BA，湘春豆18号的最佳诱导培养基为Ms+lmg／L6一BA、湘春豆13号的最佳

3、诱导培养基为l／2Ms+2m酐。6-BA+0．05mg／LmA：大豆子叶节丛生芽生根时mA浓度以2mg几为宜。cD盯基因是茉莉素信号传导途径中的重要调控基因，调控植物育性和抗性。G，ncDJJ基因是从大豆中分离克隆的c伽同源基因，将G锄coⅡ基因的全长序列插入到植物表达载体pROK2中，构建了Gmcofj表达载体，通过农杆菌介导法转化大豆。同时，对农杆菌介导大豆子叶节遗传转化条件进行了研究，结果表明，遗传转化的最佳条件为：预培养ld，共培养3d，农杆菌侵染时间为30lIlin。对抗K蛆植株进行P

4、cR检测，初步证实Gmc0，j基因整合到大豆的基因组中。关键词：大豆：子叶节；农杆菌介导；Gmc优j基因：遗传转化hea“Ⅱg，髓dde五锄seagainstpattlogens蛐dillsectS．GmC伽geneisisOlatcdandclonedf如msoybe孤，wllichsharessigIli丘camhomology、Ⅳimt

5、lcAr口扫i却s捃C伽．T11e6锄C0盯genewasi珊耐cdint0expfessionalvcctorpRoK2．T11edoningspROK

6、2一GmC叫jwere昀nsfcfredintoAgm6口cle，f“mmm乞向c招邶AGL—j．Thefhctors撕bctiIlgthcAgr0扫∞fe一“m-medi非泣仃amsfo触nofsoybeallcatyledon盯ynodeswerestIldied．Theresllltsshowmattllecondi曲璐0fpre-cIll嘛dfor1day，co—cultufedfor3daysandinfected30皿mltesarefav叫ablefbrmc缸ansf0ⅢIatio

7、n．ThePCRtcstofK锄resist锄tplantsshow血at也eGmC讲jge∞w踮intc伊atedintOsoybe觚’sg蛐ome．Keywords：soybeall；cotylcd∞arynode；如rD妇c御妇m-mI矧舭d：锄c0Ⅱge∞；Ttansf0珊州OnⅢ独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育

8、机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：杏风时间：p6年6月饽日关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名导师签名：穗『盈时间：枷e年占月凸

9、日时间：嘭年6月d日第一章前言大豆(甜，c，力e肋JL．)起源于中国，栽培历史最为悠久，是重要的粮油作物和饲料作物。至上世纪90年代中期以来，我国大豆种植面积稳定在1100万公顷以上，产量在1500万吨以上。发展我国大豆生产对改善人民的食物结构，满足植物蛋白、油脂需求，发展畜牧业、食品工业都具有重要的意义。但是在大豆生产中，常受到病害、虫害、杂草及干旱等逆境因素的影响，产量很不稳定；虽然常规育种技术在培育高产、稳产、优质、抗逆性强的新品种中发挥了重要作用，但由于受物种杂交不亲和性及与不良基因性状