孕酮对体外培养牛子宫内膜基质细胞上孕酮受体表达的影响

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1、Y959096H凳}』墼Ⅱ垡§i』t四JII农业大学硕士学位论文孕酮对体外培养牛子宫内膜基质细胞上孕酮受体表达的影响甘潇指导教师塑造整煎援学科专业盐趁遗盏直挫皇基建研究方同动擅麓殖皇眭胎生塑王捏2006年5月论文独创性声明959096。本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中小包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的

2、说明并表示了谢意。研究生签名贺津沈年关于论文使用授权的声明6月二占日本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在升i同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：导师签名喵活、0撕貉6月彩日现年6月诺日1_：一；J孕酮对体外培养牛子宫内膜蕞质细胞上孕酮受体表达的影响摘要孕酮受体(progesteronereceptorPR)基因是核受体超家族成员之一，

3、在介导与调节卵巢排卵、胚胎植入、乳腺发育等生殖生理以及相关生殖健康中起着关键的作用。在体条件下，孕酮可以引起孕酮受体表达降低，那么仅在子宫内膜上，这种调节是否存在?因此本实验目的就是探讨体外条件下孕酮对牛子宫内膜细胞PR表达的影响。实验方法为将子宫内膜细胞进行体外培养，然后在无血清培养条件下添加不同浓度的孕酮，处理不同时间，将细胞的RNA进行抽提，以／g-aetin基因为参照。采用半定量PCR方法研究PR表达水平。其意义在于，对PR进行深入全面的研究，不仅有利于阐明胚胎植入过程中孕酮的作用机制和雌性不孕的分子发病机理，推动基础理论研究的发展

4、，而且在诊断、治疗等应用医学领域也将会具有实用价值。其具体试验方法和结果如下：1．选择组织块培养方法培养牛子宫内膜基质细胞，培养体系为；DMEM／F12+FBS(原代20％，传代lO％)+100IU／ml青链霉素，在37"C，5％C02和饱和湿度条件下培养。2．将来自8头未孕黄牛个体传代培养获得的3～8代子宫内膜细胞混合后，按l中培养条件培养，直到细胞铺满培养瓶底60％后，换无血清培养液处理24小时，再用含有不同浓度孕酮(O、50、100、200和400ne,／lnl)的无血清培养液培养细胞，在孕酮处理后(1、3、6、12和2411)收集细

5、胞进行总RNA抽提。3．对总RNA进行定量后作RT-PCR反应，把RNA浓度调至l

6、

7、和基质细胞)呈放射状生长于组织周围，形态上基质细胞呈梭形或椭圆形，还有的呈不规则长条形；上皮细胞呈圆形，胞核较大而圆，到第10～14天细胞可以基本长满培养瓶底，并且细胞基孕酮对体外培养牛子宫内膜摹质细胞上孕酮受体表达的影响本上是呈集块生长，成为单层细胞，偶有细胞间插生长。2．目的基因PR和参照基因B-actinPCR优化条件为：模板量(O．8I‘l咖1)lm，循环次数35次，退火温度56℃，反应体积50m。3．半定量分析PR基因表达结果显示；孕酮受体在未处理细胞中最高表达，其次是50、100、200、400ng／ml浓度孕酮处理组；从作用时

8、间看，孕酮受体表达量从高到低依次是l、3、6、12、2411处理时间，但孕酮对孕酮受体的下调作用不与时『日J和孕酮浓度呈直线关系。低浓度组(50rig、100ng／m1)在24h时PR表达最低，而高浓度组(100rig、200ng／m1)在6h后下降不明显，基本趋于稳定。说明孕酮能够抑制体外培养的牛子宫内膜上孕酮受体的表达，而且抑制的强弱与孕酮浓度和作用时『日J有关。说明孕酮对孕酮受体表达可以在细胞水平进行调控。1关键词：牛子宫内膜孕酮受体半定lvcg·一，慵J21_7●，傅，孕酮对体外培养牛子宫内膜基质细胞上孕酮受体表达的影响Effect

9、sofProgesteroneonProgesteroneReceptorExpressioninCulturedEndometriumstromalcellsfromBovin