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《植物中游离氨基酸的提取_纯化及分析方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第28卷第3期河南科技大学学报:自然科学版Vol.28No.32007年6月JournalofHenanUniversityofScienceandTechnology:NaturalScienceJun.2007文章编号:1672-6871(2007)03-0076-04植物中游离氨基酸的提取、纯化及分析方法1,22341刘荣森,杨虹琦,黄郁维张长水,孔繁伦(1.河南科技大学林业职业学院,河南洛阳471002;2.湖南农业大学烟草工程中心,湖南长沙410011;3.洛阳广播电视大学宜阳分校,河南宜阳471600;4.河南科技大学化工与制
2、药学院,河南洛阳471003)摘要:综述了植物游离氨基酸的提取、纯化以及氨基酸的常用分析方法,包括从植物的烘干样品和鲜样品中提取、纯化游离氨基酸的方法;氨基酸的分析方法包括平面色谱法、氨基酸自动分析仪法、气相色谱法、反相高效液相色谱法、高效阴离子色谱-积分脉冲安培法,分析了各种氨基酸分析方法的优缺点。关键词:植物;游离氨基酸;提取;纯化;分析方法中图分类号:Q946文献标识码:A0前言氨基酸是植物中的一类重要的化合物,是组成蛋白质的基本单位,在植物的氮同化、蛋白质的合成、抵御病虫害等方面具有重要的作用。分析植物中的游离氨基酸的含量对研究植
3、物中的氮、氨基酸、蛋白质的代谢及干旱、盐分、病菌对植物的影响以及食用、药用价值都具有十分重要的意义。研究游离氨基[1]酸含量的变化规律对植物的育种、栽培、施肥具有指导意义。1植物中游离氨基酸的提取1.1烘干材料中游离氨基酸的提取从植物的叶片、叶脉及种子中提取游离氨基酸一般先需要干燥处理,叶片、叶脉要在105～110℃杀[2-4]青,然后60～80℃烘干、粉碎,过40目筛。一些研究者用75%或80%的酒精作溶剂从粉碎原料中[5]提取氨基酸,也有用蒸馏水作萃取溶剂提取,提取的方法是常温或加热到一定温度(小于100℃)用一定体积分数的萃取溶剂浸
4、泡2～6h,或加热回流20～30min,为了使原料中的游离氨基酸尽可能得以溶解,提取过程需重复2～3次,然后合并提取液、过滤,蒸发掉乙醇,既得到了氨基酸粗提液。也有人采用[6][7]蒸馏水作溶剂超声波提取提取的方法,或在室温下样品用50%乙醇浸泡微波萃取,然后离心过滤,[8-9]若用氨基酸自动分析仪测定氨基酸的含量,常用2%～5%的磺基水杨酸水溶液浸提。1.2鲜叶片或鲜果肉中游离氨基酸的提取[10]鲜叶片或鲜果肉一般用10%CH3COOH研磨或匀浆来进行提取,但由于鲜叶片或鲜果肉中的蛋白酶能水解蛋白质,造成游离氨基酸含量升高,故研磨要在冰
5、浴中进行,新鲜材料中的脂、蛋白质、糖等易被提出,需加入一定的试剂除去。通常用10%三氯乙酸、一定浓度的醋酸铅、磺基水杨酸或95%乙醇加入过夜沉淀,然后离心或过滤的方法除去蛋白质,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂类等。2游离氨基酸的纯化从植物中提取的氨基酸粗提液中含有较多的色素、可溶性糖、有机酸及其他杂质,有必要对氨基酸粗提液进一步进行纯化,以便下一步进行氨基酸含量的测定。[11-12]最常用的纯化方法是用732阳离子交换树脂进行纯化。732阳离子交换树脂在使用前要进行预处理,用一定浓度的盐酸浸泡树脂24h以上,然后用蒸馏水漂洗至中性,为的是除
6、去树脂中的杂质,并使其完全转化成氢型阳离子交换树脂,湿法装柱,注意树脂间不能存有气泡,把氨基酸粗提液经适当浓缩到小体积后,倒入树脂柱中,让其缓慢流入树脂层,当氨基酸作者简介:刘荣森(1964-),男,河南洛阳人,副教授,硕士生.收稿日期:2006-11-24第3期刘荣森等:植物中游离氨基酸的提取、纯化及分析方法·77·粗提液全部进入树脂后,停留10min,以便使氨基酸充分结合到树脂上,接着用一定量的蒸馏水冲洗树脂,以吸取色素、水溶性糖等杂质,当流出液变清后,用0.5～4mol/L的氨水进行洗脱,收集洗脱液至用茚三酮检测无色为止。把洗脱液用
7、旋转蒸发仪减压浓缩至干。用0.1mol/L盐酸溶解并定容之一定体积即可。该方法氨基酸损失少,纯化效果好,故最常用于植物中提取的游离氨基酸的纯化。也有研究者用活性炭进行纯化,把具有较强吸附能力的活性炭直接加入到氨基酸粗提液中,加热一[13]段时间,然后过滤,以除去色素等,但活性炭对部分氨基酸也能吸附,造成氨基酸的损失。也可用C18Sep2Pack柱进行氨基酸的纯化,但价格昂贵。3游离氨基酸的分析方法传统的氨基酸分析方法是平面色谱法,而现在已被仪器分析法所取代。3.1平面色谱法[14]平面色谱包括纸层析法和薄层层析法,用滤纸为支持物进行层析的
8、方法,称为纸层析法,纸层析法所用展开剂大多有水和有机溶剂组成,滤纸纤维与水的亲和力强,与有机溶剂的亲和力弱。因此在展层时,水是固定相,有机溶剂是流动相,将样品点在滤纸上,进行展层,样品中的各种
