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1、,2,,组基酸杂志25一20zosa人体体液游离氨基酸的超微量分析方法‘蒋涝黄美英朱赓伯苏州医学院生化教研室,,,随着医学的发展许多疾病如肝脏疾或1:2无蛋白滤液然后取滤液1毫升〔‘’,亡2’,,..病肾脏疾病脑一神经系统某些疾a:。aa蒸干用005~02MNCO一NHCO红“,〔‘,3,。。,病以及氨基酸代谢性疾病等均能引起或NaHCO缓冲调节pHg5~105加入..,不同体液中游离氨基酸的种类和浓度的改01~10毫升DNS一Cl丙酮溶液置暗室室,,变为此目前临床上迫切需一种快速简便,,温下或黑暗处37℃水浴中待混合液中黄,‘’了解不同体液游离氨基.,
2、和经济的分析方法色完全消失为止然后进行第二次蒸,。,。。:酸变化的情况以便于疾病的诊断和治疗本干备作点样之用2聚酞胺薄膜层析文在1981年分离和鉴定了正常人血浆中21种(,,1)点样取一定量的丙酮溶解第二次,,氨基酸尿液中18种氨基酸羊水中17种氨基,,x了蒸干物用平头微量注射器在7厘米l吕,酸以及脑脊液中种氨基酸的工作基础的聚酞胺薄膜左下角距左下边一厘米‘“夕,DNS一CI荧光反,,5上进一步摸索了关于处进行点样每次层析点样总量为一10,聚酚胺,2应薄膜层析分离游离氨基酸的超微微升分多次点完并控制样点直径不超过。。(,量分析方法毫米2)溶剂展开对第一系
3、列展层剂分:,,三次进行第一次用I溶剂展开方向个,,,材料与方法全程第二次用l溶剂展开方向手半多,用,程第三次I溶剂展开方向,(与:.:~,、,。材料1标准撷氨酸溶液5Xl。“M第一二次方向垂直)全程对第二组系10一1。人1,2汉10一几”,3x10一飞。,x:,MM4列展层剂分两次进行第一次用I溶剂方~‘”。。:,,10M2DNS一C1丙酮溶液新鲜配向手全程,第二次用卫溶剂方向*(与,一。。制1毫克DNSCl/1ml丙液3,全程二m紫酮落一雇第一次方向垂直)(3)366::,:二层溶剂丙组系列第一组I甲酸水,观察各外层析灯下种氨基酸的荧光层析图.,,:
4、·。15:100(V:V)兀苯冰醋酸=9:1谱i并确定每氨基酸的相应荧光斑点〔“’,,二。弋V:V)皿醋酸乙醋:甲醇:冰醋酸3,检测体液氨基酸荧光层析图谱中每种,:,20:1:1《V:V:V)第二组I苯:,:氨基酸的荧光弧度推算氨基酸的含量。,,冰醋酸=9:17(V:V)I甲酸:水=,(1)用铅笔轻轻画出每个荧光斑点剪。(V:V)。。:,,T.5:功4聚疏胺薄膜国产下置3毫升洗脱剂中浸抱4小时犷置暗。。:,。,试制5洗脱剂使用两种一种重蒸甲:RF一510室(2)检侧使用日不岛津荧,。。:n,醇另一种重蒸氯仿6仪器366m紫光分光光度计检测每种相应氨基酸的
5、荧光,。,:,,外光层析灯荧光分光光度计弧度检测多件增益10/加狭缝10奎宁5,:。:,1S一C工化20℃n,方法样品处理和pN体室温最大激发彼为360m最大发射..一.液011。毫升用钨酸钠一盐酸或魏份5%(吸收波5。功。一波)为功磺柳酸或75%一无水乙醇制备成l汤或1:3计算汤a尹、一几2,umiooml.体液中某种游离氛基徽炙光强度一空白ht3x10/“法为说明本法还有可能应标准氮基被的荧光甄度一空白诵.再提高灵敏度一个数最级“标准浓度〔,二,”要际瑟豁注无力铸度践铆]6020如即结果与讨论。1标准曲线绘制并与Airlart等人(“’。绘制的标准曲
6、线进行对比5一’工,一‘“,一’“,以欠10M10M2x10M3一‘。一‘。xloM以及4xloM标准撷氨酸分DNS一al浓度V一,别加入DNSCI1mg八ml丙酮溶液1林1,,2林1,4卜!,6砰1和8协1,进行DNS一Cl化,图2标准曲线2,制成荧,然后点样层析光大小强度不同的。2:在同一批号聚酸胺薄膜重复试验,,3萤光斑点剪下置毫升重蒸氯仿洗脱剂,D,,,上取同一浓度的NS一撷氨酸2微升进洗脱4一510荧光分光中小时最后在RF,,。行了9次重复点样层析然后分别用3毫升以标准领氨酸浓度为横坐标,光度计检测,,1:,:氯仿洗脱进行检测其结果见表其相应的
7、荧光强度为纵坐标作图如下一‘“,110MDNS一颇氛酸检测的再现性标准曲线(1)洗脱剂为氯仿最大激表36On,51,一发波m最大发射波为0nm以荧光强度1。“M。O5协mAA/1ml和logDNS/lml丙酮溶液结8。593。8.,一。。合检测仪器为日本岛津RF510荧光分光88985名。色es一5。光度计。。869548。。2892。.8名954。。87969强市叹甘先叉8。91OJ。0幼30208。9。1000。灸光强度均数(X)86796。标准差(SD)。34022‘.。。、。,‘10-*。,~。_SD0‘‘.万z口加石西二‘’“35如!1N戈开示
8、默L粉一“),肠一又~,DNS一Val浓度表2DNS一绷氛酸的回收率测定图1标准
