各种材料全基因组提取试剂盒takara

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1、CodeNo.9765研究用TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0说明书v201306Da目录内容页码●制品说明1●制品内容1●保存与运输1●实验前的准备1●操作方法2●实验例3●洗脱体积对DNA提取量和浓度的影响5●洗脱次数对DNA提取量的影响5●注意事项6●不同材料的DNA提取量6●实验材料最大起始量7●Q&A7●制品说明本试剂盒是用于提取血液、革兰氏阴性细菌、培养细胞及植物组织（植物幼嫩的叶、茎、根等）、动物组织（Blood/Gram-negativeBacteria/CulturedCells

2、/PlantTissue/AnimalTissue）等基因组DNA的广谱型小量纯化试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解系统，由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，组织细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。使用本试剂盒可从50～100μl的哺乳动物全血（含抗凝剂）、1～10μl的有核红细胞全血（含抗凝剂）、1.0～5.0E+09的革兰氏阴性细菌、1.0E+05～1.0E+07的培养细胞、2～25mg的动物组织、10~25mg深加工品或25～100mg幼嫩植物组织中纯化得到多至数十微克的高纯度基

3、因组DNA，提取得到的基因组DNA可用于PCR反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种分子生物学实验。●制品内容（50次量）本试剂盒分试剂PartI与PartII两部分。■PartI-20℃保存ProteinaseK（20mg/ml）1mlRNaseA（10mg/ml）0.5mlPartII室温（15-25℃）保存BufferGL*112mlBufferGB*112mlBufferWA*128mlBufferWB*224mlElutionBuffer14mlSpinColumns50支Collectiontubes50支1含有强变性剂，应避免与

4、皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理。*2首次使用前，请添加56ml的100%乙醇，混合均匀。【试剂盒之外所需准备试剂】◆无水乙醇◆灭菌水◆PBS溶液●保存与运输1.本试剂盒分两部分保存，PartI请保存在-20℃；PartII于室温下（15-25℃）保存。2.本试剂盒分两部分运输，PartI请在-20℃条件下运输；PartII于室温下（15-25℃）运输。●实验前的准备1.准备56℃水浴。2.BufferGL若出现沉淀，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。3.BufferWB在首次使用前，请添加56ml的100%乙醇，混合均匀。4.

5、洗脱结合于DNA制备膜上的基因组DNA时，将ElutionBuffer或灭菌蒸馏水加热至65℃使用将会提高基因组DNA的洗脱效率。-1-●操作方法操作流程见图1，细胞或组织裂解后全套操作约需20分钟（如果组织需要裂解，则所需时间因组织不同而不同），分为组织或细胞裂解、DNA与膜结合、DNA纯化等步骤，详细说明如下：1.组织或细胞的裂解：实验材料使用不同的实验材料需采用不同的裂解步骤，具体说明如下：剪碎或液氮研磨◆动、植物组织，深加工品的裂解：加BufferGL、ProteinaseK和①取2～25mg的动物组织、深加工品或25～100mg植物组RNaseA织（切勿使用

6、超过最大起始量的组织），置于2mltube中，56℃温浴用剪刀尽可能地剪成碎块，对于一些质地坚硬的组织也可以进行液氮研磨。裂解液②加入180μl的BufferGL、20μl的ProteinaseK和10μl的RNaseA（10mg/ml），于56℃水浴温浴至组织完全裂解向裂解液中加BufferGB和无水（2~3小时，难裂解的材料可以适当延长裂解时间甚至过夜乙醇裂解。植物材料可能残存纤维状组织无法完全裂解，裂解之溶液移至SpinColumn中后先12,000rpm离心2分钟，去除杂质之后再进行后续操作）。注）温浴时可时常将样品取出进行振荡或吸打以加速裂解。弃滤液③向裂解

7、液中加入200μlBufferGB和200μl100%乙醇，充分吸打混匀。BufferWA清洗SpinColumn◆全血的裂解：BufferWB①有核红细胞全血取1～10μl（含抗凝剂）、无核红细胞全血取50～100μl（含抗凝剂）加入至2mlTube中，用PBS溶液或灭菌水补至200μl。弃滤液②加入180μl的BufferGB、20μl的ProteinaseK和10μl的RNaseA（10mg/ml），充分吸打混匀，于56℃水浴温浴SpinColumn移至1.5mlTube上10分钟。③向裂解液中加入200μl100%乙醇，充分吸打混匀。加Elu