TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书

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1、TaKaRaCode：D9194PlantDNAIsolationReagent（100次量）说明书宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明1●制品内容1●保存1●使用注意事项1●操作方法1●实验例2●Troubleshooting6●参考文献6●关联制品6●制品说明PlantDNAIsolationReagent是根据氯化苄法构建的，可以从植物材料中提取基因组DNA的Ready-to-use试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性，将植物样品冻结融解后，再使用Pipet

2、Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。●制品内容（100次量）组份名称包装量ExtractionSolution140mlExtractionSolution28mlExtractionSolution3（100%BenzylChloride）15ml【试剂盒之外所需准备试剂及器具】◆异丙醇◆70%

3、乙醇◆TEBuffer◆RNaseA（必要时使用）◆Micropipet◆Micropipet用Tip◆1.5mlMicrotube◆离心机（转速可达12,000rpm）◆桌面离心机◆桌面振荡仪●保存室温。ExtractionSolution2低温保存可能会有沉淀析出。如果发生析出现象，请于50℃溶解后，再于室温保存。●使用注意事项ExtractionSolution3中含有氯化苄，具有刺激性，使用时请注意。●操作方法1.将植物组织用剪刀剪至3mm以下角形状，重量在10～100mg范围内，装入1.5mlMicrotube中，于-20℃冻结。注：切

4、断植物组织的剪刀要预先使用70％乙醇擦拭，特别要注意擦拭刀刃部位。2.取出冻结的植物组织于室温放置5分钟左右，使其融解。3.轻微离心，将植物组织收集在Microtube底部。4.使用PipetTip尖端将植物组织按压Microtube底部10次左右，进行物理破碎。5.加入400μl的ExtractionSolution1，剧烈振荡5秒钟。如果植物组织仍滞留于Microtube底部，需用手指轻弹Microtube使其悬浮。6.轻微离心，加入80μl的ExtractionSolution2，剧烈振荡5秒钟。添加ExtractionSolution2后

5、产生白色沉淀，剧烈振荡后溶液呈白浊状态。如果植物组织仍滞留于Microtube底部，需用手指轻弹Microtube使其悬浮。7.轻微离心，加入150μl的ExtractionSolution3，剧烈振荡5秒钟。如果植物组织仍滞留于Microtube底部，需用手指轻弹Microtube使其悬浮。-1-实验操作流程简图8.轻微离心2秒钟以内，于50℃温浴15分钟。注：长时间离心ExtractionSolution3将会分层，植物组织剪至3mm以下角形状，称重后于-20℃务必控制在2秒钟以内。冻结（10～100mg植物组织/1.5mlMicrotube

6、）9.12,000rpm4℃离心15分钟。10.取上层水相移至新的1.5mlMicrotube中，上层水冻结的植物组织室温放置5分钟左右融解相约400μl。注意尽量不要混入水相以外的物质。11.添加等量的异丙醇，轻柔混匀。注：长时间存放可能会有夹杂物沉淀，尽量迅速进入轻微离心后、用PipetTip尖端将植物组织按压Microtube底部10次左右下一步操作。12.12,000rpm4℃离心10分钟。加入ExtractionSolution113.弃上清，注意不要吸取沉淀。振荡仪振荡5秒，轻微离心注：沉淀有时肉眼看不见。加入ExtractionSo

7、lution214.加入1ml70％乙醇，清洗沉淀。15.12,000rpm4℃离心3分钟。振荡仪振荡5秒，轻微离心16.弃上清，注意不要吸取沉淀。加入ExtractionSolution317.沉淀干燥，加入适量TEBuffer（约20μl）溶解沉淀。振荡仪振荡5秒，轻微离心注：沉淀过度干燥将导致难以溶解，请注意。50℃温浴15分钟注1.回收的基因组DNA溶液可直接作为PCR反应的模板或直接进行限制酶切断等反应。上层水相移至新的Microtube中使用20μlTEBuffer溶解基因组DNA时，PCR反应液（25μl反应体系）或限制酶酶切反应液

8、（20加入异丙醇混匀后，12,000rpm4℃离心10分钟μl反应体系）中添加的DNA溶液在0.5～2μl之间为好。除去上清，加入1ml