酵母基因组DNA提取试剂盒

《酵母基因组DNA提取试剂盒》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、VER:1112酵母基因组DNA提取试剂盒（GD2415YeastgDNAMiniprepkit）产品组成成分GD2415-00GD2415-01GD2415-02包装规格450250ezBindDNAMiniColumns4502502mLCollectionTubes8100500BufferYTL1.0mL13mL65mLBufferYBL1.0mL13mL65mLBufferKB2.2mL28mL130mLDNAWashBuffer2.0mL15mL3x24mLGlassBeads220mg3g15g

2、ElutionBuffer2.0mL15mL70mLBufferSE2.5mL30mL130mLLyticase110μL1.3mL5x1.3mLProteaseK2.8mg35mg5x35mgProteinaseKStoreBuffer120μL1.5mL7.5mLRNaseA25μL270μL1.4mLInstructionBooklet111本实验仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。贮存条件及产品稳定性o本试剂盒自购买之日起可保存12个月。其中蛋白酶K和溶壁酶贮存在-20C，RNa

3、se储存于4°C，其他试剂及用品可保存于室温（22-25°C）。产品说明TMEZgene酵母gDNA提取试剂盒适用于从不同来源的酵母细胞中纯化基因组DNA。采用独特的缓冲液，结合膜吸附技术，一次性可处理3mL处于对数生长期的酵母菌液（YPD培养基中OD600为1.0），纯化到A260/A280为1.7-1.9的DNA15-30μgDNA，整个过程无需有机溶剂抽提，有效降低污染和处理时间，能同时处理多个样品。本试剂盒提取的细胞核DNA，包括质粒DNA。若第一次使用酵母gDNA试剂盒，请在操作之前仔细阅读说明书，

4、酵母细胞需培养至对数生长期，收集菌液，裂解细胞，通过吸附柱吸附基因组DNA，再经两步快速漂洗，去除多余盐分和蛋白质污染物，最后用水或者低盐缓冲液将DNA洗脱下来。纯化到的DNA可直接用于下游实验而不需要额外的纯化。要点请按照标准溶解蛋白酶K（蛋白酶K应避免反复冻融，建议溶解后分装在几个小管，并贮藏在-20°C，使用前取出置于室温中）。GD2415-00：加入110μLElutionBuffer；GD2415-01：加入1.4mLElutionBuffer；GD2415-02：每管加入1.4mLElution

5、Buffer；按标准在DNAWashBuffer中加入无水乙醇，终浓度为80％。GD2415-00：加入8mL无水乙醇；GD2415-01：加入60mL无水乙醇；GD2415-02：加入96mL/每瓶无水乙醇；温度较低时，BufferBL缓冲液会生成少量沉淀，使用之前于37°C温浴备用。安全信息BufferBL为离液盐，当与漂白剂作用时会发生化学反应，勿直接加入漂白剂及酸溶液，使用时请带上手套并保护眼睛。技术支持：021-54461558订货电话：021-54461657实验前需准备的材料oo台式离心机

6、、已灭菌的1.5mL离心管、30C水浴箱、55C振荡水浴箱、o65C培养箱或水浴箱和无水乙醇(96%-100%)操作步骤7注：此操作步骤适用于可从3mL酵母培养液(<2x10个细胞)中提取基因组DNA。1.在YPD培养基中培养酵母细胞质至OD600为1.0。72.将3mL酵母菌液(<2x10个细胞)置于室温下4,000xg离心10分钟。o3.去掉上清液，加入480μLBufferSE和25μL溶壁酶溶液重悬细胞，30C温浴30分钟。4.室温下4,000xg离心10分钟，弃上清，收集沉淀。5.加入200μLBu

7、fferYTL重悬细胞，加入50mg玻璃珠，涡旋5分钟。o6.加入25μL蛋白酶K溶液，振荡混匀。50C振荡水浴，至细胞完全裂解。一般情况下，不超过1小时细胞即可完全裂解。若无振荡水浴箱，温浴期间每20-30分钟颠倒混匀一次。7.向样品中加入5μLRNaseA颠倒几次以混匀，室温放置5分钟。8.13,000rpm离心5分钟，沉淀不溶碎片，小心吸取上清至离心管中。o9.加入220μLBufferYBL，最大速度涡旋15秒，65C水浴10分钟，加入BufferYBL后可能会形成絮状沉淀，沉淀的生成并不影响DNA纯

8、化。10.加入220μL无水乙醇(96-100%)，最大速度涡漩20秒彻底混匀。若此时仍有沉淀，用移液枪反复吸取10次，打散沉淀。11.将吸附柱插入收集管中，将第10步得到的样品液（包括可能生成的沉淀）加入吸附柱中，13,000rpm离心1分钟，倒掉废液并丢掉收集管。12.将吸附柱插入一个新的2mL收集管，加入500μLBufferKB，13,000rpm离心1分钟，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管