全血基因组dna提取试剂盒

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1、威格拉斯生物技术（北京）有限公司全血基因组DNA提取试剂盒(WholeBloodDNAExtractionKit)产品说明：本试剂盒先行裂解红细胞，收取有核细胞，再用DNAVzol提取基因组DNA。适合于提取0.5ml以上的全血样品，提取方法简单快速，不需酚氯仿抽提或蛋白酶消化，可在40min完成数个样品的处理。获得的DNA可直接用于Southern杂交，PCR，DNA克隆以及其它相关操作。产品内容与储存方法：名称数量保存条件DNAVzol100mlRT10xRLB(红细胞裂解液)125mlX2RT可作

2、100次0.5~2.5ml全血的DNA提取。常温运输，室温保存。有效期12个月。所需其它试剂：使用者需准备75%乙醇和DNA溶解液(双蒸水、TE缓冲液或8mMNaOH)。操作方法：1.红细胞裂解：0.5~5ml全血红细胞的裂解：1)冻存的抗凝全血先在37℃水浴中快速解冻；4℃存放的抗凝全血也应在37℃水浴复温。同时准备足够的15ml或50ml离心管，作相应的标记。2)用蒸馏水稀释10xRLB至1xRLB，所需1xRLB约为全血总量的10倍体积。取0.5~5ml全血分别转入标记的离心管，加入9倍体积的1x

3、RLB，盖严，颠倒混匀5次，室温放置5min，期间可颠倒混匀数次以加速红细胞裂解。3)室温4000g离心5min，倾去液体，管底应可看到白细胞团块。用吸管或加样器吸去管壁和管底剩余液体。如白细胞团块中仍有明显红色，可加1倍（原始全血）体积的1xRLB，重悬细胞团块，按上述步骤重复裂解红细胞，收取白细胞沉淀。5ml以上全血红细胞的裂解：1)抗凝全血室温1500g离心10min，用吸管吸出上层血浆与下层红细胞之间的白细胞层。一同吸出的红细胞将在以下步骤中去处。吸出体积可为0.5~1ml，转入5ml或15ml

4、离心管。2)在吸出的白细胞液中加入3~5倍体积的1xRLB，盖严，颠倒混匀5次，室温放置5min，期间可颠倒混匀数次以加速红细胞裂解。3)室温4000g离心5min，倾去液体，管底应可看到白细胞团块。用吸管或加样器吸去管壁和管底剩余液体。2.裂解白细胞：电话：（010）58941231,（010）58941232传真：（010）58941232网址：www.vigorous.bjs.cn电子邮件：runon@public3.bta.net.cn威格拉斯生物技术（北京）有限公司每0.5~2.5ml全血，加

5、入1mlDNAVzol。用加样器缓缓吹打，使其完全裂解。转移至1.5ml离心管中。裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。3.DNA沉淀：在装有裂解物的离心管中加入0.5倍体积的无水乙醇（每1mlDNAVzol加入0.5ml无水乙醇），轻轻颠倒混匀5~8次，室温放置2~3min。室温8,000g离心8min，沉淀DNA。4.清洗DNA：加入1ml75%乙醇至离心管中，颠倒数次以重悬DNA；室温8,000g离心8min，沉淀DNA，倾去洗涤液体。再重复清洗1次。5.溶解：仔细吸去剩余乙醇，不要完全晾干DNA，加入

6、适量（200~500μl）水或TE缓冲液，使DNA沉淀溶解。可用吸头缓缓吹打助溶或放置4℃过夜待其自溶，也可用8mMNaOH缓冲液使DNA沉淀快速溶解。存放于4℃或-20℃。注意事项：1)每0.5ml全血的基因组DNA提取量为10~25μg。2)肝素抗凝全血提取的DNA对PCR有抑制作用。3)白细胞沉淀中如有明显血凝块，可用吸头或镊子挑出。4)用8mMNaOH缓冲液溶解的DNA，可加入1/10体积0.1MHEPES（未调pH值）。DNA溶液的pH值应为8.0。电话：（010）58941231,（010）

7、58941232传真：（010）58941232网址：www.vigorous.bjs.cn电子邮件：runon@public3.bta.net.cn