酵母基因组NA提取试剂盒（离心柱型）.doc

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1、酵母基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）GK109150PrepsGK1092100PrepsGK109320Preps一.试剂盒组成ComponentsGK109150PrepsGK1092100PrepsGK109320PrepsGenCleanColumn2.0-mlCollectionTubeLysisYbufferDigestionSolution(a)WashSolution(b)PBSolutionExtSolutionElutionBuffer(c)TE(pH8.0)BoiledRNaseAProteinaseK(d)Lyticas

2、e(e)protocol505010ml20ml12ml20ml20ml10ml15ml240ul250ul250ul110010020ml40ml24ml40ml40ml20ml25ml480ul500ul500ul1202010ml8ml12ml8ml8ml10ml15ml120ul100ul100ul1(a)DigestionSolution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。(b)首次使用前，必须在WashSolution瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持WashSol

3、ution中的乙醇含量。如果发现WashSolution由于运输或保管不当造成体积严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。(c)ElutionBuffer为2.5mMTris-HCl,pH8.5，请4℃保存。TE(pH8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。(d)ProteinaseK分装冻存，不得将ProteinaseK直接加到DigestionSolution中，以免酶失活。(e)请于-20℃分装保存Lyticase，减少反复冻融的次数，以免酶失活。二．产品简介酵母细胞有一层坚硬的细胞壁，妨

4、碍了研究人员从酵母细胞中快速有效地分离提取基因组DNA。本试剂盒提供可以高效酶解酵母细胞壁的Lyticase和能够特异结合DNA的离心吸附柱，用于提取酵母细胞中的基因组DNA。同时本产品对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用PBSolution与ExtSolution处理细胞裂解液，再经过能高效、专一吸附DNA的离心柱吸附后，可最大限度去除杂质蛋白以及脂类物质。三．主要用途从酵母等真菌中小规模抽提基因组DNA。四．主要特点1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙

5、醇沉淀等步骤。3.快速，简捷，单个样品操作一般可在2小时内完成。4.多次柱漂洗确保提取酵母基因组的高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb～100kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。五．需自备试剂无水乙醇六．保存方法及注意事项试剂盒于常温运输，ProteinaseK、Lyticase以及BoiledRNaseA请于-20℃保存，其它组分室温（15-25℃）保存，有效期为一年。DigestionSolution中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤。眼

6、睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。七．操作步骤1.取1-2ml过夜培养的酵母菌液，加入至1.5ml离心管中，室温8,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清，收集菌体。2.向菌体中加入200ulLysisYBuffer，加入5ulLyticase,充分混匀，30℃温育30min。3.8,000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀。注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，实验时应根据酵母的菌株和酵母细胞的数量的不同，对Lyticase的浓度和温育时间进行适当调整。4.向沉淀中加入2

7、00ulTE溶液重悬沉淀，充分混匀。5.在200ulTE悬浮样品中，加入300ulDigestionSolution，混匀；加入4ulRNaseA混匀，55℃保温10分钟；再加入4µlProteinaseK，55℃保温10～30分钟。注意：（1）应按次序加入，不得将ProteinaseK先加入DigestionSolution，再加到样品中。（2）保温时间取决于样品的类型。对于细胞样品，55℃保温10分钟足以使细胞裂解，释放出基因组DNA。降解完全的样品应是透明粘稠液体。6.依次加入300ulExt溶液和300ulPB溶液，充分摇动混匀，1200

8、0rpm室温离心5分钟，溶液将分为上下两层，上层溶液为蓝色，基因组DNA存在于下层溶液中，两层中间可能会有一些沉淀物。然后用1mlTip