临床医学毕业论文不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞生物学特性的研究.doc

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1、XX大学毕业论文不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞生物学特性的研究2014年6月25日不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞生物学特性的研究作者：耘涛，秦书俭，王超，单伟【摘要】F1的观察不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞(adiposederivedstromalcells,ADSCs)牛物学特点与年龄的关系，为临床寻找理想的种了细胞并迅速获取所需ADSCs提供实验依据。方法使用密度梯度离心法分离不同年龄段脂肪间充质干细胞进行培养，保留贴壁细胞传代，分析脂肪间充质干细胞的纯度，观察细胞生长情况，检测其增殖活性、细胞周期。结

2、果不同年龄段ADSCs均贴壁生长，呈典型ADSCs形态和生长特征，传代细胞的壇殖速度比原代细胞快，但随着年龄的增长，原代及传代培养ADSCs的增殖能力下降，生长周期延长。结论ADSCs的增殖能力和活性随着年龄的增长而降低，但各年龄段ADSCs均可满足临床不同患者组织工程种子细胞的要求。【关键词】脂肪间充质干细胞；年龄；大鼠；细胞培养；増殖ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatebiologicalcharacteristicsofratadiposederivedstromalcells

3、(ADSCs)ofdifferentages.MethodsADSCswereisolatedbydensitygradientcentrifugationfromdifferentagestages,andculturedinvitro.Theadherentcellswerepreservedtopassage,thepurityofADSCswasanalyzedbyirnmunocytochemistrymethod,andcellgrowthwasobserved,thenproliferation

4、capabilityandcellcycleweredetected.ResultsAlltheADSCsobtainedfromdifferentagestagesgrewwellandshowedgoodmorphologyandgrowthcharacteristics.Theproliferationrateofpassagecellswashigherthanthatofprimarycells,buttheproliferationactivityreducedwithaging,andcellc

5、yclewasprolonged・ConclusionTheproliferationcapabilityandactivityofADSCsdecreasedwithaging.However,ADSCsofdifferentagestagescanallmeettheneedsofdiffidentpatientsfortissueengineeringseedcells・KEYWORDS:adiposederivedstemcell;age;rat;cellculture;proliferation组织

6、工程的兴起和迅猛发展为临床修复重建带来了新的治疗途径，成为戸前最有前景的生理性修复技术［12］。种子细胞的选择是组织工程的基础和关键之一。2001年ZUK等［3］通过脂肪抽吸术获得脂肪间充质干细胞(adiposederivedstromalcells,ADSCs)oADSCs具有来源丰富、易于获取、自体移植可以避免排斥反应以及许多伦理问题等优点。大量研究发现，骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)的含量、质量以及活性随着年龄的增长而下降［4］。但是不同年龄

7、的ADSCs在体外生长及增殖能力是否具有差异，是否能够满足临床修复的需要?ADSCs能否成为组织工程新的最理想的种子细胞?本研究旨在探讨不同年龄阶段ADSCs的生长增殖能力及其机制，为ADSCs的体外培养及临床应用提供依据。1材料与方法1.1主要试剂DMEM、胎牛血清(Gibco)、I型胶原酶(Sigma)、EDTA、MTT(Amerison)>CD34、CD44、CD49d、CD106(Sigma)o1.2实验动物分组健康SD大鼠，雌雄不限，按月龄分为幼年组(1月龄)、成年组(12刀龄)和老年纽(24刀龄)

8、。体重分别约为150、400、750go1.3ADSCs的分离培养及传代取SD大鼠，脱颈处死，消毒，无菌条件下取腹股沟部及肾下鬼脂肪组织，去除其他组织，用PBS冲洗3次，将脂肪组织剪成大约lmm3小块，置20LI型胶原酶屮，消化60min,然后1000r/min,离心10min,弃上清，用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基制成细胞悬液，计数，接种于培养瓶屮，常规培养。待细胞融合达80%时1：2