超声辅助热乙醇提取法测定浮游植物叶绿素a的方法优化 需要冰箱

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1、第34卷第4期水生生物学报VO1．34．NO．42010年7月ACTAHYDR0B10L0GICASINICAJu1．．2010D0I：10．3724／SP．J．1035．2010．00856超声辅助热乙醇提取法测定浮游植物叶绿素a的方法优化梁兴飞郭宗楼(浙江人学牛物系统1程与食品科学学院，杭州310029)OPTIMIZATIONOFTHEMETHoDONDETERMINATloNOFPHYTOPLANKTONCHLOROPHLLABYUSINGUIRASOUND．ASSISTEDHOT-ETHANOLEXTRACTIONLIANGXing-F

2、eiandGUOZong—Lou(SchoolofBiosystemsEngineeringandFoodScience，Zh~iangUniversity,Hangzhou310029)关键词：超声辅助；热乙醇；叶绿索Ⅱ；法优化Keywords：Ultrasound-assisted；Hot—ethanol；Chlorophyll口：Methodoptimization中图分类号：Q一3l文献标识码：A文章编号：1000—3207(2010)04—0856—06浮游枘物长期以来一直被作为水质的指标生物，而采用超声波细胞粉碎仪破碎细胞，用单因素试

3、验和正交浮游植物的种群生物量(Phytoplanktonbiomass)是水生态试验确定热乙醇提取浮游植物叶绿素a方法中各因素的系统的一个重要指标⋯。叶绿素a存在于所有浮游植物体影响并选择最佳条件，在此基础上对该力法的精密度进内，占细胞干重的1％一2％，因此浮游植物叶绿素a含量行评价。成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛应用j。日前，1材料与方法浮游植物口r绿素a的测定力‘法主要有高效液相色谱法、荧光光度计法和分光光度计法。高效液相色谱法南于操作繁1．1藻种及培养条件琐，不适于样品的快速榆测口。而荧光光度计法虽然能铜绿微囊藻(Microcysti

4、saeruginosa)和鱼害微囊藻够较为快速测量叶绿素a的含量，但是南于一些降解产fMicrocystisichthyoblabeKutz)(购白中同科学院水生生物物可对光谱产生十扰因而会造成误差⋯。分光光度汁研究所淡水藻种库)，培养基为BG11培养基，光照强度为法由于操作简单、准确可靠等优点成为了目前最普遍的测2500lx，温度为30。C，光暗周期为14h：10h，对数生长期定浮游植物叶绿素Ⅱ的方法[11,12]。分光光度计法又分为多的藻液为实验材料。色法和单色法，多色法南于测量数据较多，误差大，已经1．2测定原理很少使用，目前大多采用的是以

5、丙酮、乙醇等作为萃取溶存天然水体中，浮游植物中不仅存在着具有光合活剂的单色法，丙酮法应用较早，目前际上仍在广泛使性的叶绿素a，而日．存在着没有光合活性的脱镁叶绿素a，用。近年来，从萃取效果、安全等考虑，逐渐采用乙醇作因此应用叶绿素a作为浮游植物生产量的主要指标时，为萃取溶剂来测定叶绿素a的含量，并有研究对热乙醇必须将叶绿素a与脱镁叶绿素a区分开来。法的误差进行_r探讨及比较r与丙酮法的差异l】J，而叶绿素经酸化处理后，镁原子被氢原子取代，叶关于热乙醇法的各个冈素对提取叶绿素a的影响尚未报绿素a降解为脱镁叶绿素a。脱镁叶绿素a与等量的叶绿道。研究证

6、实巾于超声波具有强人的机械传质作用以及空素a相比，存665llm波长下，具有较低的消光系数化作用等系列效应，使得胞快速破碎，有利于溶剂浸(1．0／1．7)。故用酸化的‘法，测定I1绿素前后光密度的入细胞而可以提高目标成分的提取率lJ】。冈此，本研究变化。如果天然水体中脱镁叶绿素相对含量较高，酸化处收稿日期：2009—08—03；修订日期：2010—04—12基金项目：水体污染控制与治理同家科技重大专项(2008ZX07421一OO1)资助作者简介：梁兴飞(1983一)，男，汉族，山西省晋中人；硕士研究生；主要从事生物控藻技术研究．E—mail：l

7、iangxingfei922@163．corn通讯作者：郭宗楼，E-mail：zlguo@zju．edu．cn4期梁兴飞等：超声辅助热乙醇提取法测定浮游植物叶绿素a的方法优化857后光密度的变化就较小；反之，脱镁叶绿素的相对试验冈素2：萃取温度分圳为60。C、65。C、70。C、靖越低，酸化处卵光密度的变化就越大【17]c,根据这个原75。C、80。C，超声时间为10min，乙醇浓度为80％。，选J{j合适的汁算公式，就叮以汁算出叶绿素a与脱镁试验冈素3：乙醇浓度分别为50％、60％、70％、80％、叶绿素a的带。90％，超卢时间10rain，萃

8、取温度80。C测定过程中，凡参与计算的各光密度值都应减去1．5超声辅助热乙醇提取法的正交优化试验750nm处的光密度值，以消除悬浮物质的