RNA干扰沉默人端粒酶逆转录酶基因对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响.pdf

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1、·1868·中华实验外科杂志2014年9月第31卷第9期ChinJExpSurg，September2014，Vo1．31，No．9·卒申经夕卜科·RNA干扰沉默人端粒酶逆转录酶基因对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响陈健陈谦学【摘要】目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法构建靶向hTERT的小干扰RNA(siRNA)表达质粒转染U87细胞，通过Westernblot检测hTERT蛋白的表达水平，通过逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测hTERTmRNA表达水平，采用噻唑蓝(M1TI1)法及流式细胞仪分别检测转染后U8

2、7细胞的增殖活性及凋亡率。结果与空白对照组及阴性对照组比较，各siRNA—hTERT干扰组hTERT蛋白表达水平明显降低；各siRNA—hTERT干扰组hTERTmRNA相对表达量分别为0．79±0．11、0．58±0．15、0．39±0．16，与阴性对照组比较明显降低，其差异有统计学意义(P<0．05)；与空白对照组及阴性对照组比较，转染siRNA—hTERT后U87细胞的增殖受到明显抑制且在第3天时最明显；转染48h后各siRNA—hTERT干扰组U87细胞凋亡率分别为(14．31±0．93)％、(17．57±0．61)％、(22．68±1．04)％，与空

3、白对照组及阴性对照组比较明显增加，其差异有统计学意义(P<0．05)。结论靶向hTERT基因的siRNA转染U87细胞后可以显著抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的发生。【关键词】RNA干扰；人端粒酶逆转录酶；胶质瘤；细胞增殖TheefectofsilencinghumantelomerasereversetranscriptasebyRNAinterferenceonU87gliomacellproliferationandapoptosisChenJian，ChenQianxue．DepartmentofNeurosurgery，RenminHos—pitafo，

4、WuhanUniversity，Wuhan430060，ChinaCorrespondingauthor：Chen90n，EmaiZ：Chengqx666@sohu．corn【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofhumantelomerasereversetranscriptase(hTERT)onU87gliomacellproliferationandapoptosis．MethodsThesmallinterferingRNA(siRNA)expressionplasmidtargetinghTERTwascons

5、tructedandtransfectedintoU87gliomacells．TheexpressionlevelofhTERTproteinandmRNAwasdetectedbyWesternblottingandreversetranscription·-polymerasechainre·-action(RT—PCR)respectively．TheU87gliomacellproliferationandapoptosiswereanMyzedbymethylthiazoltetrazolium(Mqq")assayandflowcytometrv

6、．respectively．ResultsComparedwiththeblankcon—trolgroupandthenegativecontrolgroup，theexpressionlevelofhTERTproteinineachsiRNAgroupwassignificantlyreduced(P<0．05)．TherelativeexpressionleveIofhTERTmRNAineachsiRNAgroupwas0．79±0．11．0．58±0．15and0．39±0．16respectively．whichwassignificantlyl

7、owerthaninthenegativecontrolgroup(P<0．05)．Ascomparedwiththeblankcontrolgroupandthenegativecontrolgroup，theproliferationofU87gliomacellsaftertransfectionwassignificantlyinhibitedandthestrongestinhibitoryeffectwasobservedonthethirdday．TheapoptosisrateofU87gliomacellsofineachsiRNAgroup

8、whichwastransfected