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《RNA干扰沉默人端粒酶逆转录酶基因对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、·1868·中华实验外科杂志2014年9月第31卷第9期ChinJExpSurg,September2014,Vo1.31,No.9·卒申经夕卜科·RNA干扰沉默人端粒酶逆转录酶基因对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响陈健陈谦学【摘要】目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)对胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法构建靶向hTERT的小干扰RNA(siRNA)表达质粒转染U87细胞,通过Westernblot检测hTERT蛋白的表达水平,通过逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测hTERTmRNA表达水平,采用噻唑蓝(M1TI1)法及流式细胞仪分别检测转染后U8
2、7细胞的增殖活性及凋亡率。结果与空白对照组及阴性对照组比较,各siRNA—hTERT干扰组hTERT蛋白表达水平明显降低;各siRNA—hTERT干扰组hTERTmRNA相对表达量分别为0.79±0.11、0.58±0.15、0.39±0.16,与阴性对照组比较明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组及阴性对照组比较,转染siRNA—hTERT后U87细胞的增殖受到明显抑制且在第3天时最明显;转染48h后各siRNA—hTERT干扰组U87细胞凋亡率分别为(14.31±0.93)%、(17.57±0.61)%、(22.68±1.04)%,与空
3、白对照组及阴性对照组比较明显增加,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向hTERT基因的siRNA转染U87细胞后可以显著抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的发生。【关键词】RNA干扰;人端粒酶逆转录酶;胶质瘤;细胞增殖TheefectofsilencinghumantelomerasereversetranscriptasebyRNAinterferenceonU87gliomacellproliferationandapoptosisChenJian,ChenQianxue.DepartmentofNeurosurgery,RenminHos—pitafo,
4、WuhanUniversity,Wuhan430060,ChinaCorrespondingauthor:Chen90n,EmaiZ:Chengqx666@sohu.corn【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofhumantelomerasereversetranscriptase(hTERT)onU87gliomacellproliferationandapoptosis.MethodsThesmallinterferingRNA(siRNA)expressionplasmidtargetinghTERTwascons
5、tructedandtransfectedintoU87gliomacells.TheexpressionlevelofhTERTproteinandmRNAwasdetectedbyWesternblottingandreversetranscription·-polymerasechainre·-action(RT—PCR)respectively.TheU87gliomacellproliferationandapoptosiswereanMyzedbymethylthiazoltetrazolium(Mqq")assayandflowcytometrv
6、.respectively.ResultsComparedwiththeblankcon—trolgroupandthenegativecontrolgroup,theexpressionlevelofhTERTproteinineachsiRNAgroupwassignificantlyreduced(P<0.05).TherelativeexpressionleveIofhTERTmRNAineachsiRNAgroupwas0.79±0.11.0.58±0.15and0.39±0.16respectively.whichwassignificantlyl
7、owerthaninthenegativecontrolgroup(P<0.05).Ascomparedwiththeblankcontrolgroupandthenegativecontrolgroup,theproliferationofU87gliomacellsaftertransfectionwassignificantlyinhibitedandthestrongestinhibitoryeffectwasobservedonthethirdday.TheapoptosisrateofU87gliomacellsofineachsiRNAgroup
8、whichwastransfected
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