正交分析法优化裂褶菌多糖的微波辅助提取工艺-论文.pdf

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1、第23卷第3期河南城建学院学报V01．23NO．32014年5月JournalofHenanUniversityofUrbanConstructionMav．2014文章编号：1674—7046(2014)03—0045—05正交分析法优化裂褶菌多糖的微波辅助提取工艺木张虽栓，李延垒(河南质量工程职业学院，河南平顶山467000)摘要：采用响应曲面法优选和探讨微波提取裂褶茵多糖的最优工艺。在单因素试验的基础上采用SAS8．2软件设计试验，用响应面分析优化提取时间、料液比、提取温度、微波强度各因素及其相互作用的最佳组合。结果表明，裂褶茵多糖的最优

2、提取工艺条件提取时间为20min，料液比为1：28．5，提取温度为51℃，微波强度为548W，此条件下，多糖实际提取率为1．765％。与其他方法比较，微波提取方法时间短，得率高，是裂褶茵多糖提取的一种优选方法。关键词：响应面法；裂褶茵多糖；微波；提取；提取率中图分类号：TS201．3文献标识码：A裂褶菌多糖(schizophyllan)是菌体经发酵培养的中性胞外多糖，研究表明，裂褶菌多糖的结构与分子量的高低与裂褶菌菌种的选择、培养和发酵条件的有关，而多糖的分子量又直接影响了多糖的生物学活性和开发前景，其在调节免疫功能、抗肿瘤、抗辐射等方面有显著

3、的疗效I2，特别是分子量在450kDa以上的多糖在医药领域的应用最为广泛，需求量最大。目前，对裂褶菌多糖提取工艺的研究，主要有酸提取法、热水浸提法和稀碱提取法等。微波辐射辅助提取法具有选择性高、提取时间短、提取率高等优点。本研究将微波技术用于高分子量裂褶菌多糖的提取，组合提取工艺以期达到提高提取率、减少能耗的目的。1材料与方法1．1材料与试剂裂褶菌(SchizophyllumcommuneFr．)种由昆明云覃科技开发有限公司提供。1．2仪器与设备普通恒温摇床，中国科学院武汉科学仪器厂；HZQ—F：。。全温度振荡培养箱，太仓市华美生化仪器厂；UV

4、一2102PC紫外可见分光光度计，德国Bruker公司；2K一82A型真空干燥箱，上海市实验仪器总厂；320一S型pH计，METTLERTOLED；AE100S电子分析天平；GalanzWD700ATL17—3电脑型烧烤微波炉(功率700W)。1．3试验方法1．3．1培养条件菌种采用PDA固体培养基，将菌种接种到试管斜面培养基上，于室温静置活化3d，活化好的斜面基金项目：河南省科技攻关项目(142102210222)。收稿日期：2013—12—27第一作者简介：张虽栓(1970一)，男，河南平顶山人，河南质量工程职业学院副教授。46河南城建学院

5、学报2014年5月菌种接入装有50mL种子培养基的三角瓶中27℃下培养2d，得到液体菌种；接着将菌种接种到固体培养基27℃下培养7～8d，至菌丝体充满整个培养基，结束发酵过程。1．3．2纯度鉴定凝胶柱层析：将SephadexG一100装于1．6(cm)×20cm玻璃旋塞柱并平衡，SPG上样量1mg，用双蒸水洗脱，每管收集3mL，流速0．5mI／min。采用硫酸一苯酚法⋯在490nm处隔管检测OD值。1．3．3微波提取裂褶菌多糖的提取工艺流程斜面种子一培养液体菌种接种一固体发酵培养一干燥一粉碎一微波提取一乙醇沉淀一粗裂褶菌胞外多糖含量测定一粗多糖

6、纯化(脱色、脱蛋白)—成品1．3．4裂褶菌多糖得率的测定裂褶菌多糖含量的测定采用水浸一醇沉法提取测定法，经适当稀释后用苯酚一硫酸法测定溶液中多糖含量。裂褶菌多糖提取率计算公式¨：多糖提取率(％)=鲨主塑塑鱼蔷警烫x100％1．4裂褶菌多糖微波提取工艺优化1．4．1单因素试验选取微波强度、提取温度、料液比、提取时间4个因素作单因素试验。取一定量粉碎的裂褶菌干体，利用微波在微波强度在450～650W，加入料液比(质量与体积比)1：10～1：35的蒸馏水，10～60℃的温度下对裂褶菌多糖进行了5～30min进行提取，探讨其对裂褶菌多糖提取率的影响。1

7、．4．2响应面优化提取条件根据单因素试验结果，确定了最佳条件后，以Box-Benhnken中心组合实验设计原理进行试验，设计了4因素5水平组合试验优化裂褶菌多糖的提取工艺。2结果与分析2．1微波提取裂褶菌多糖工艺的优化2．1．1微波强度对裂褶菌多糖提取率的影响微波强度对裂褶菌多糖提取率的影响见图1。褂醛蛊爬诽提取时间／min图1微波强度对裂褶菌多糖提取率的影响图2提取时间对裂褶菌多糖质量分数的影响由图1可以看出：在提取时问为30min，液料比为1：30，提取温度为50℃的条件下，随着微波功率的逐渐提高，裂褶菌多糖提取率不断增加。当微波功率达到5

8、50W时，达最大值，再随功率的增加，多糖提取率变化不明显，所以选取550w为最佳功率。2．1．2微波提取时间对裂褶菌多糖提取率的影响提取时间对裂褶菌多