比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性.docx

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1、比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性以下是操作步骤及结果判读标准：将待测菌液制备成10-2g/L和10-4g/L菌悬液，分别用22SWG标准接种环蘸取1环（即0.01ml）的菌液，用划线法均匀接种至对照及含药培养基表面，应注意是菌液尽可能均匀分散于培养基斜面，最终的接种量为10-4mg和10-6mg。接种后培养基置于37℃培养，4周后读菌落数，计算耐药百分比，≤1%为敏感，＞1%为耐药。耐药率（%）=含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%解读：将高倍稀释的菌液即10-4g/L菌悬液接种至生长对照管，也就是不含药物的培养管；将低倍稀释的菌液即10-2g/L菌悬

2、液接种至含药管，只接种2管，仅此而已。不是生长对照管和含药管分别接种两种浓度的菌悬液，估计LZ是这样理解的吧。因接种的2种不同浓度的菌液在浓度上相差了100倍，最后理论上两种菌的菌落数也应该相差在100倍左右，但因为加入了药物，所以如果菌是对所测药物敏感，那菌落数比例肯定是小于1/100，即耐药率<1%；如果为耐药菌，药物无法抑制菌落生长，相对的菌落数比例会大于1/100，耐药率>1%。目前结核分枝杆菌复合群的药敏试验一线药物以比例法为金标准，是WHO制定公布的，而二线药物的金标准则以仪器法的MGIT960为金标准。但目前在国内还都以固体L-J培养基为主，MGIT

3、960的费用高，在县级以下的地区应用显然是不现实的每份标本只接种2只管：生长对照管和含药管，没有必要做双份的。如果是做了双份的，菌落数也不会相差太大，因为菌液是一样的，除非你的菌长了很长时间，老化或死亡的结核菌多，而活菌的数量过少；还有可能是你的培养基有问题，比如不是同一批号的，药物浓度有差别。结核菌药敏试验中菌龄是非常重要的，MGIT960的说明书中明确提出菌龄从肉眼在培养基上能观察到算起，生长不能超过14天，否则生长久了再做药敏试验就不准确了，特别是对吡嗪酰胺的药敏结果影响是非常大的。如果按照你的说法，同时做了双份的，两份结果相差很大，那就要重新再做一遍了。希

4、望对你有所帮助。7h10培养基调剂ph到5.5，加入12.5到800μg/ml的pza,同时设置一个未加pza的对照平板。将在7h9中培养2周的mtb约107-109cfu/ml.稀释10-2和10-4之后接种10μl在固体培养基上。37度4周后统计10-2的菌落数计算mic。80010-240010-220010-210010-25010-22510-212.510-2010-4OD600=0.1=107cfu/ml计算耐药百分比，≤1%为敏感，＞1%为耐药。耐药率（%）=含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%