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《噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌方法学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华结核和呼吸杂志2004年12月第27卷第12期 ChinJTubercRespirDis,December2004,Vol.27,No.12·801··论著· 编者按 本期刊出4篇噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌和耐药性鉴定的论著。结核分枝杆菌的检出是建立在噬菌体的种特异性和活性的基础上,采用耻垢分枝杆菌为指示菌,并且在较高菌数水平上和一些致病性非结核分枝杆菌有一定的交叉性,因此,临床特异性问题是应该进一步探讨并让临床医生知晓的。结核分枝杆菌耐药性检测方法是建立在药物处理后存活耐药菌产生的噬菌斑的基
2、础上的新的检测系统,因此药物的临床耐药界限以及相应的最佳系统的确定要慎重,包括使用菌量、观察时间、耐药菌比例的探讨和临床疗效关系的观察。自然,两方面的研究都不能缺少与常规系统的对比。因此,我们需要对实验方法学进行更严谨的深入研究,并与临床研究密切结合,以及慎重对待其临床意义和应用环境。一种新技术在从理论研究向临床应用的转化过程中,许多问题需要更加严谨和科学的研究和评价。噬菌体生物扩增法是有希望应用于临床的新的检测系统。因此,通过4篇论著的发表以期获得更多的关注,并期待着更多的突破。噬菌体生物扩增法快速检测
3、结核分枝杆菌方法学研究胡忠义 倪莲娣 靳安佳 董惠贤 钟敏 李建农 翁心华【摘要】 目的 建立噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。方法 应用分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌,比较各种检测条件对测定结果的影响,并将所建方法9用于痰标本检测,结果与BIOTECLab公司产品比较。结果 1×10噬菌斑形成单位(PFU)/ml的噬菌体,37℃感染60min可检出200～500条/ml结核分枝杆菌。杀毒剂100mmol/ml,室温作用5min可完8全灭活受试噬菌体。指示细胞浓度在1×10条
4、/ml时,形成的噬菌斑清晰,便于计数。加热灭活的细菌和指示细胞不被噬菌体感染。H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌参考菌株检测结果均为阳性,7种非分枝杆菌和16种常见非结核分枝杆菌检测结果为阴性,4种非结核分枝杆菌(偶然、胞内、金色、草分枝杆5菌)在高浓度时(>1×10条/ml)检测结果为阳性。重复试验结果表明,本法批间和批内变异系数均<15%。痰标本氢氧化钠2半胱氨酸液化方式的阳性检出率为94%(49/52),显著高于氢氧化钠液化2结果的62%(32/52,χ=15106,P<0101);预培养1d的阳性
5、检出率为65%(51/78),显著高于未预培2养结果的40%(31/78,χ=18105,P<0101)。临床标本检测结果表明,我们的试剂与进口试剂检测结果基本相同。结论 噬菌体生物扩增法快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆菌的快速检测,但是测定条件的选择极为重要。【关键词】 分枝杆菌噬菌体; 分枝杆菌,结核; 诊断技术和方法StudyonthemethodforrapiddetectionofMycobacteriumtuberculosisbyphageamplifiedbiologicallyassa
6、y3HUZhong2yi,NILian2di,JINAn2jia,DONGHui2xian,ZHONGMin,LIJian2nong,WENGXin2hua13BasicLaboratoryofTuberculosis,ShanghaiPulmonaryHospital,Shanghai200433,ChinaCorrespondingauthor:HUZhong2yi,Tel:0086202126511500621024,Email:huzhongyi@vip.citiz.net【Abstract】Ob
7、jectiveTosetupamethodforrapiddetectionofMycobacteriumtuberculosis(MTB)byphageamplifiedbiologically(PhaB)assayandtoinvestigatetheoptimaltestcondition1MethodsVarioustestconditionswerecomparedinordertoobservetheinfluenceondetectiveresultsafterMTBwasinfectedb
8、yMycobacteriophage1Thetestconditionestablishedwasusedfordetectionofsputumsamples,andtheresultswerecomparedwithBIOTECLabtest1ResultsThebacterialconcentrationofMTBin2002500/mlwasdetectedbyPhaB9assayat1×10plaqueforming
