噬菌体生物扩增法快速检测痰标本中结核分枝杆菌的临床应用

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1、噬菌体生物扩增法快速检测痰标本中结核分枝杆菌的临床应用徐可钧1柳金德1张书丽1姜淑华2栗艳2(1丹东市屮心医院呼吸科118002；2丹东市屮心医院检验科118002)【摘要】FI的探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测痰标本屮结核分支杆菌(MTB)的临床应用价值。方法应用Phab、改良罗氏培养法及厚涂片法共同检测419例痰标本。结果419例痰标本,噬菌体法检测132例阳性，阳性率31.50%(132/419)；厚涂片法检测64例阳性，阳性率15.27%(64/419)；改良罗氏培养法126例阳性，阳性率30.07%(126/419),P<0.01,三种方法的检出率有差异，且噬菌

2、体法检测率最高。64例痰涂片阳性改良罗氏培养阳性标本噬菌体法检测60例阳性，阳性率93.75%；62例痰涂片阴性罗氏培养阳性标本噬菌体法检测46例阳性，阳性率74.19%；293例痰涂片阴性罗氏培养阴性标本中噬菌体法检测26例阳性,阳性率8.87%。结论Phab法检测测痰标本MTB具有较高的检出率，简便快速,不需要特殊仪器设备，费用低廉,可作为MTB检测快速筛选方法。【关键词】分枝杆茵噬菌体分支杆菌结核快速检测结核病细菌学检查是诊断肺结核及判定疗程的金标准，快速有效的细菌学检测是国内外研究的重点，也是结核病诊断的重要依据。然而，传统的涂片镜检不能区分活菌和死菌，且检出率偏低，无法满足临

3、床要求。新兴的分子生物学技术，包括聚合酶链反应(PCR)技术、基因芯片技术等，价格高昂，技术难度大，无法广泛在发展屮国家推广；培养分离法耗时，结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌都可生长，特异性差。噬菌体生物扩增法(Phab)以其噬菌体生长快、特异性高等特性，能快速准确地检出结核分枝杆菌，近年來在结核诊断研究中备受关注［1］。本研究采用噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测419例痰标本，并与传统厚涂片法及改良罗氏培养法进行比较，现报告如下。1材料与方法1.1标本来源：419例痰标本取自我院2008年1月至2009年12月来我院就诊的门诊和住院患者深咳留取的合格痰标本。所有入选病例均满足以下标准

4、：疑诊为肺结核但尚未开始抗结核治疗，至少3年内未接受抗结核治疗。1.2试剂盒：FASTPIaqueTB结核分枝杆菌快速诊断试剂盒（Phab）由英国Biotec实验室公司生产,沈阳金标准有限公司提供；改良罗氏培养基由沈阳金太阳有限公司提供；抗酸染液购自珠海贝索公司。2方法2.1噬菌体法2.1.1痰标本处理：取5ml痰标本，加入1〜1.5倍体积3%NaOH溶液进行消化，振荡混匀，室温孵育15mine加入培养液（FPTB完全培养基）至20ml,4000r/min离心（离心半径8.5cm）15min后弃去上清液。再加入lml培养液，重悬沉淀物，无菌条件下转移至反应管中。2.1.2检测：加0.1

5、ml噬菌体于各反应管中，轻轻摇晃，37°C孵育60min后分别加入0.1ml杀病毒剂，确保杀病毒剂与反应管内壁完全接触，置于室温5mino加5ml培养液于各反应管中，颠倒混匀，再加lml指示细胞试剂于各反应管中，颠倒混匀，然后将冷却至55°C左右的琼脂液5ml加入各反应管中，快速混匀，立即将各反应管中的内容物分别倒入相应的空无菌培养皿中，置于室温定型，倒置于37°C培养箱中培养，18-24h后判读结果。每次检测均同吋设定阳性对照和阴性对照平皿。2.1.3结果判定：噬菌斑数≤19个为阴性;≥20个为阳性。2.2涂片法检测：涂片法检测按照中国防廃协会制定的《结核病细菌学检验规程

6、》进行，均采用抗酸染色法。2.3MTB的改良罗氏培养检测：按中国防虏协会制定的《结核病诊断实验室检验规程》进行。使用改良罗氏培养基，接种后3〜7d观察结果，以后每周观察1次。8周后培养基未见菌落，报告分枝杆菌培养阴性。2.4统计学分析采用SPSSI0.0统计软件分析数据，计数资料比较采用x2检验，P<0.01表示结果有差异。3结果419例痰标本，厚涂片法检测64例阳性，阳性率15.27%(64/419)；改良罗氏培养法126例阳性,阳性率30.07%(126/419),两种检验方法的检测结果有统计学意义(P<0・01).见表1与表2；噬菌体法检测与改良罗氏培养法检测结果比较

7、无差异(P?0.01),见表1与3•噬菌体法检测132例阳性，阳性率31.50%(132/419)o64例痰涂片阳性改良罗氏培养阳性标本噬菌体法检测60例阳性,阳性率93.75%,62例痰涂片阴性改良罗氏培养阳性标本噬菌体法检测46例阳性,阳性率74.19%；结果见下表：表13种检测方法的检出率比较注:p<0.01三种方法的检出率有差异表2Phab与涂片法检测结果比较注：P<0.01,两种检验方法的检测结果有差异，phab阳性结果较