结核分枝杆菌环介导恒温扩增_lamp_快速检测方法的评价

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1、２０１１年１月第３３卷第１期·４７··论著·结核分枝杆菌环介导恒温扩增（ＬＡＭＰ）快速检测方法的评价戴广明１２２２３１１１１曹以诚杜正平陈洵黄曙海逄宇周杨黄海荣赵雁林（１．北京结核病胸部肿瘤研究所北京１０１１４９；２．华南理工大学广州５１０６４０；３．广西疾病预防控制中心南宁５３００００）摘要：目的对国内建立的结核分枝杆菌ＤＮＡ环介导恒温扩增（ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍ－ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＬＡＭＰ）快速检测方法进行了介绍和评价。方法实验菌株来源于北京结核病胸部肿瘤研究所。以结核分枝杆菌作为研究对象，设计了４条ＬＡＭ

2、Ｐ引物特异地识别结核分枝杆菌中ｇｙｒＢ基因的６个特殊区域。所有的菌株样本提取ＤＮＡ作为模板，加入ＬＡＭＰ反应管后，６５℃恒温反应６０ｍｉｎ即可。其结果可以通过肉眼观察到的颜色变化来判断。结果实验共验证了７９株临床和标准菌株。对于菌株的培养物，ＬＡＭＰ实验的灵敏度为１００％，特异度为９２％。结论结核分枝杆菌ＬＡＭＰ快速检测方法是一种快速、可靠的结核分枝杆菌诊断方法。关键词：分枝杆菌，结核；核酸扩增技术通讯作者：赵雁林（ｚｈａｏｙａｎｌｉｎ＠ｔｂ１２３．ｏｒｇ）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａ

3、ｔｉｏｎ（ＬＡＭＰ）ｉｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ１，ＣａｏＹｉｃｈｅｎｇ１，ＣｈｅｎＸｕｎ２，ＤｕＺｈｅｎｇｐｉｎｇ２，ＨｕａｎｇＳｈｕｈａｉ３，ＰａｎｇＹｕ１，ＤａｉＧｕａｎｇｍｉｎｇ１，ＨｕａｎｇＨａｉｒｏｎｇ１，ＺｈａｏＹａｎｌｉｎ１ＺｈｏｕＹａｎｇ（１．Ｂｅｉｊｉｎｇｃｈｅｓｔｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０１１４９，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ；３．ＣＤＣｏｆＧｕａｎｇｘｉｐｒｏ

4、ｖｉｎｃｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ５３００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＡＭＰ）ｉｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｓｅｔｏｆｆｏｕｒＬＡＭＰｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅ－ｓｉｇｎｅｄｆｏｒｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇｓｉｘｄｉｓｔｉｎｃｔｒｅｇｉｏｎｓｏｎｔｈｅｔａｒｇｅｔＤＮＡ（ｇｙｒＢ）．ＴｈｅＤＮＡｓｏｆＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｓｔｒａｉｎｓｆ

5、ｒｏｍＢｅｉｊｉｎｇＣｈｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ａｍｐｌｉｆｉｅｄａｔ６５°Ｃｆｏｒ６０ｍｉｎ，ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅａｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｓｉｍｐｌｅｎａｋｅｄｅｙｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｔｏｔａｌｏｆ７９ｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓａｎｄｓｔａｎｄａｒｄｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆＬＡＭＰｗａｓ１００％ａｎｄ９２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＬＡＭＰｉｓａｒａｐｉｄａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅａｌｔｅ

6、ｒｎａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｎｇＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｉｎｆｅｃ－ｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｔｏ：ＺｈａｏＹａｎｌｉｎ（ｚｈａｏｙａｎｌｉｎ＠ｔｂ１２３．ｏｒｇ）基金项目：１．北京市科技新星计划（２００７Ｂ０３９）；２．中－法梅里埃基金会结核病防治项目。·４８·２０１１年１月第３３卷第１期细菌学检查是发现结核病传染源的主要途径和株，４８株临床结核分枝杆菌。手段，是确定结核病诊断和化疗方案的重要

7、依据。１．１．２结核分枝杆菌（ＬＡＭＰ法）基因快速检测试但由于敏感性低或所需时间过长等原因，致使结核剂盒（以下简称ＬＡＭＰ检测试剂盒）由我们和华南病细菌学检查一直不能满足临床诊治的需求，存在理工大学共同研发，基因组ＤＮＡ纯化试剂盒（Ｇｅ－延误诊断和误诊情况，同时也耽误了患者得到及时ｎｏｍｉｃＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ）购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。治疗的时间，影响了治疗效果，也使得疾病的传播难１．２方法于控制。因此，缺乏早期、准确和廉价的诊断技术是１．２．１检测目标菌株和靶标引物结核分枝杆菌制约全球结核病控制的严重障碍。基因快速检测方法的目

8、标菌株确定为结核分枝杆菌近年发展起来的环介导等温扩增技术复合群，包括结核分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕ－（ＬＡＭＰ），完全突破了传