斑点杂交法检测结核分枝杆菌临床应用价值探讨.doc

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1、斑点杂交法检测结核分枝杆菌临床应用价值探讨作者：陆文英单位：江苏省盐城市慈航医院，江苏盐城224001【摘要】目的：探讨斑点杂交法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:用抗酸染色法、L-J培养法、PCR法和斑点杂交法平行检测76例临床标本和28种标准菌株。结果:46例肺结核患者痰标本抗酸染色法、L・J培养法、PCR法和斑点杂交法结核分枝杆菌检测阳性率分别为43.4%、50.0%、73.9%和56.5%；30例非结核患者痰标本、19种非结核分枝杆菌和9种非分枝杆菌标准株培养法和斑点杂交法检测结果均为阴性，PCR法有3例阳性。结论:斑点杂交法检测结核分枝杆菌方

2、法简便，结果可靠，可用于结核病的快速诊断。【关键词】结核分枝杆菌点杂交酸染色L・J培养TheClinicalValueofDetectionMycobacteriumTuberculosisbyDotBlotHybridizationLUWen-ying,etal(CihangHospitalofYanchengCity,JiangsuYancheng224001,China)Abstract:Objective:Tostudytheclinicalvalueofdetectingmycobacteriumtuberculosisbydotblothybr

3、idization.Methods:Acidfaststain,L-JculturefCRanddotblothybridizationwasuesdtodetecttheseventy-sixclinicalisolatesandtwenty-eightkindsofnormaltuberculosis.Result:AcidfaststainL-JculturefCR,dotblothybridizationwasusedtodetectthemycobacteriumtuberculosisofsputumofforty-sixpulmonarytu

4、berculosis,andtheirpositiveratewas43・4%、50.0%,73.9%,56.5%respectively.Theresultsofthirtynon-pulmonarytuberculosis,nineteenkindsofnon-mycobacteriumtuberculosisandninekindsofnon-mycobacteriwhichwasdetectedbycultureanddotblothybridizationwereallnegative.Theresultsofthreespecimenswere

5、positivewhentheyweredetectedbyPCR.ConclusiomUsingdotblothybridizationtodetectmycobacteriumtuberculosisissimplifiedandtheresultsisreliable・ItcanbeuesdtorapiddiagnosisofTB・Keywords:Mycobacteriumtuberculosis;Dotblothybridization;Acidfaststain;L-Jculture近年來结核病的发病率大幅提高，为早期、快速、准确诊断结核病，我

6、们建立了斑点杂交法克接检测痰标本中结核分枝杆菌，并应用于临床，同时与传统的涂片抗酸染色法、L-J培养法、PCR法进行平行观察，以探讨具临床应用价值。1材料和方法1.1菌种來源：19种非结核分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所，9种非分枝杆菌來自中国科学院微生物研究所°1.2标本来源：46例结核病人痰标本来自2004年至2006年盐城第一人民医院门诊病人和盐城山第二人民医院门诊、住院病人，所有病人均经培养或临床证实患有活动性肺结核，30份非结核病人痰标本來白盐城第一人民医院呼吸科住院病人。标本采集后平行做4项检查，首先集菌涂片镜检，余下标本经3%NaAC

7、-NaOH处理后分别用L-J培养法、PCR法、斑点杂交法进行检测。1.3试剂和仪器：斑点杂交法所用探针山上海生工公司合成，其5’端以地高辛标记，探针序歹U：5’・GGTGGAAAGCGCTTTAGCGGT-3'。FQ-PCR试齐！J苗深圳匹基公司提供，扩增仪为罗氏公司lightcycle型。1.4方法141斑点杂交法：根据结核分枝杆菌16srRNA保守序列设计探针，英5′端以地高辛标记，标本经3%NaAC-NaOH消化后，常规异硫氤酸呱裂解，酚■氯仿抽提，异丙醇沉淀法提取结核分枝杆菌rRNA,将抽提的rRNA纯化后冇接点样于硝酸纤维膜上，用地高

8、辛标记探针杂交，酶呈色观察结果。1.4.2FQ-PCR法，严格按试