sre元件报告质粒构建、转染和活性测定

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1、第1期张弦，等：SRE元件报告质粒构建、转染和活性测定113结果表明，10tzg／mL胰岛素处理，活化了2种SRE元件的活性；而2．5t~mol／L25一羟基胆固[参考文献]醇和25t~mol／L胆固醇结合处理，抑制了SRE元件的活性。在上述2项处理中，处理试剂对EliGoldsteinJL，DeBose-BoydRA，BrownMSProteinsen—pGL3一basic-SRE1的作用均比对pGL3一basic-sorsformembranesterols[J]．Cell，2006，124(1)：35—46．L2JHortonJD，GoldsteinJI，BrownMSSREBP

2、s：activatorsSRE3的作用更强烈。ofthecompleteprogramofcholesterolandfattyacidsyn—thesisintheliver[J]．JClinInvest，2002，109(9)：l-41125—1131．l_2L3jHortonJD，ShahNA，warringtonJA，eta1．Combineda—1．Onalysisofoligonucleotidemicroarraydatafromtransgenic0o．8andknockoutmiceidentifiesdirectSREBPtargetgenes[J]．0．6Proc

3、NatlAcadSciUSA，2003，100(21)：12027—12032．O-4[4]Amemiya-KudoM，ShimanoH，HastyAH，eta1．Tran—0-2scriptionalactivitiesofnuclearSREBP一1a，一lc。and一2todi卜0VehicleInsulin25．()H，CH0ferenttargetpromotersoflipogenicandcholesterogenic样品genes[J]．JLipidRes，2002，43(8)：1220—1235．图6胰岛素和25—0H／CHO对SRE3活性的影响Es]BriggsMR

4、，YokoyamaC，WangX，eta1．Nuclearproteinthatbindssterolregulatoryelementoflowdensitylipopro—teinreceptorpromoter，I：Identificationoftheproteinand3结论delineationofitstargetnucleotidesequence[J]．JBiolChem，1993，268(19)：1449O一14496．SREBP通过与靶基因SRE元件结合来调节[6]IAuJW，AhlbornTE，BriggsMR，eta1．Identificationofa胆固醇

5、和脂质合成。因此，可以通过检测一些活novelsterol—independentregulatoryelementinthehuman性物质对SRE元件的应答来初步判断该物质是lowdensitylipoproteinreceptorpromoter[J]．JBiolChem，否影响脂质合成，进而预测SREBP相关活性物2002，275(7)：5214—5221．质的作用机制r1。报告质粒在研究中经常被用[7]MatsudaM，KornBS，HammerRE，eta1．SREBPcleavage-activatingprotein(SCAP)isrequiredforincrease

6、dlipid在测定启动子对基因表达的影响[1引。其一般步synthesisinliverinducedbycholesteroldeprivationandin—骤包括：①将目的基因调控序列或效应元件克隆sulinelevation[J]．GenesDev，2001，15(10)：12O6—1216．并插入含报告基因的质粒中；②将重组质粒转染[8]BrownMS，GoldsteinJL．TheSREBPpathway：regulation到细胞系；③测定报告基因的表达水平，从而评ofcholesterolmetabolismbyproteolysisofamembrane-价在调控序列

7、指导下对靶基因表达可能的诱导boundtranscriptionfactor[J]．Cell，1997，89(3)：331-340．[9]TangJJ，uJG，QiW．InhibitionofSREBPbyasmalltool—作用。ecule，betulin，improveshyperlipidemiaandinsulinresist—本文通过克隆和人工合成了人LDIr启动子anceandreducesatheroscleroticplaqu