rna恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究

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1、中国人兽共患病学报58ChineseJournalofZoonoses2014，3O(1)DOI：10．3969／cjz．j．issn．1002—26942014．01013RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究李园园，程松。，陆俊梅。，胡忠义，崔振玲摘要：目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法，评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16SrRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物，42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析，对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆

2、菌临床分离株进行鉴别检测；同时以16SrRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性，其他阴性，与测序结果一致；在分枝杆菌临床分离株检测中，鉴定胞内分枝杆菌63株，其余为非胞内分枝杆菌，PCR测序为胞内分枝杆菌63株，其余166株为非胞内分枝杆菌，其灵敏度为100(63／63)，特异度为100％(166／166)。结论RIAR【)IMcA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性，且检测快速，有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。关键词：RNA恒温扩增；熔解曲线；胞

3、内分枝杆菌中图分类号：R378文献标识码：A文章编号：1002—2694(2O14)01—0058—05RNAisothermaltranscription’。mediatedamplificationandreal__timedetectioncombinedmeltcurveanalysisfortheidentification0fMycobacteriumZfrncZZZ口，．LIYuan—yuan’，CHENGSong。，LUJun—mei。，HUZhong—yi。，CUIZhen—ling。(1．SchoolofBiologyandBasicMedicalSc

4、iences，SoochowUniversity，Suzhou215123，China；2．ShanghaiKeyLaboratoryofTuberculosis，ShanghaiPulmonaryHospital，School0fMedicine，TongiiUniversity，Shanghai200433，China)ABSTRACT：TheaimofthestudyiStoestablishandevaluateaRNAisothermaltranscription-mediatedamplificationandreal—timedetectioncombine

5、dmeltcurveanalysismethod(RIARD-MCA)fortheidentificationofMycobacteriumintracellulareinclinicalisolates．SpecificprimersincorporatingtheT7promotersequence。andRNAprobeswasdesignedbasedonM．intra—cellular16SrRNAgeneandundergonesuccessivecyclesofamplificationusingT7RNApolymeraseat42℃．Thenweused

6、21referencestrains，5non-mycobacteriumstrainsand229clinicalstrainstoevaluatethespecificityandsensitivityofthenewas—say．Atthesametime，wecomparedtheresultswiththe16SrRNAandhsp65genesequencing．Inthistest，onlyM_intracellularwaspositive，withthesensitivityof100(63／63)andspecificityofi00(166／166)

7、，comparingtOPCRgenesequen—cing．It’SsuggestedthatRIARD-MCAisasensitive，specificandrapidmethodinidentificationofM_intracellular，whichmaybeusedforrapididentificationofMintracellularinclinicalisolates．KEYWORDS：RNAisothermalamplification；meltcurveanalysis；Mycobacteriumin