rna干扰下调nrf2对u251细胞自噬的影响

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1、中华神经外科疾病研究杂志(ChinJNeurosurgDisRes)2013；12(6·5O9·文章编号：1671—2897(2013)12—509—04·论著·RNA干扰下调Nrf2对U251细胞自噬的影响周渊。王汉东h纪祥军丛子翔潘灏励宁(南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院神经外科；第二军医大学南京临床医学院南京军区南京总医院神经外科，江苏南京210002)摘要目的研究RNA干扰下调核因子E2相关因子2(Nrf2)对U251细胞自噬的影响。方法建立RNA干扰下调Nrt2表达的U251细胞系并在瞬时转染48h后，电镜观察细胞自噬相关结构的形态，Westernblot法、吖啶橙染色流式细

2、胞术定量分析自噬水平的改变。结果与对照组相比，Si．Nrf2组Nrf2的蛋白水平明显下降(P<0．001)，自噬泡结构增多，微管相关蛋白1轻链蛋白3BII型(LC3B．II)的蛋白水平明显升高(P<0．001)，酸性囊泡数量明显增多(P<0．05)。结论RNA干扰下调Nrf2可以显著增强U251细胞的自噬水平。关键词多形性胶质母细胞瘤；核因子E2相关因子2；自噬；RNA干扰中国图书资料分类号R739．41文献标识码AEfectofdown-regulationofNrt2byRNAionautophagyinhmgUon~celline13251ZHOUYuan，WANGHandong，Jl嘞

3、，CONG，PANHao，LIMDepartmentofNeurosurgery，SchoolofMedicine，NanjingUniversity，NanjingGeneralHospitalofNanjingMillitaryCommand，PL4；DeportmentofNeurosurgery，SchoolofMedicine，Second尬￡缸MedicalUniversity，NanjingGen-eralHospitalofNanjing慨如抛Command，PIA，Nanjing210002，ChinaAbstractObjectiveToinvestigatetheefec

4、tofdown—regulationofnuclearfactorerythroid2-relatedfactor(Nrt2)byRNAionautophagyinhumanglion~celllineU251．MethodsU251celllinedown—regulatingNrt2byRNAiwasestablished．Forty—eighthoursaftertransienttransfection，electronmicroscopyWDSperformedtoobservetheautophagyrelatedstructures，andthelevelsofautophagy

5、wereanalyzedbyWesternblotandacridineorangestainingusingflowc~ometry．ResultsIngroupSi·Nrl2，theNri2proteinexpressionWassignificantlydown—regulated(P<0．001)，whilethemicrotubule—assecimedproteinlightchain3B—II(LC3B—lI)proteinexpressionwasincreased(P<0．{301)comparedwithcontrolgroups．Thedown—regulationofN

6、rl2byRNAialsoledtoasignificantincreaseofautophagievacuolesandacidicvesie~arorganelles(P<0．05)．ConclusionDown-regulationofNrt2byRNAisignificantlyenhancestheautophagyofU251iomacellline．KeywordsGlioblastonmnmhiforme；Nrf2；Autophagy；RNAi多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，relatedfactor2，Nrf2)是一个重要的保护性转录因GBM

7、)是最常见的恶性原发颅内肿瘤，即使行最大化子，是细胞内氧化还原状态的感受器，而Nrf2／Kelch手术切除+放疗+化疗的综合治疗，GBM患者的平样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch—likeECH—associated均生存时间仅有12个月左右I2J。研究发现，氧化protein1，Keap1)通路是主要的抗氧化应激通路。目应激在许多恶性肿瘤的发生和进展中起了很重要的前普遍认为，Nrf2在恶性肿瘤中