rnai检测大鼠转酮酶基因在肝癌细胞系smmc-7721增殖中的作用

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1、中西医结合肝病杂志2013年第23卷第6期·355··实验研究-doi：10．3969／j．issn．1005-0264．2013．06．013RNAi检测大鼠转酮酶基因在肝癌细胞系SMMC7721增殖中的作用梁超方肇勤胡卫吴中华高必峰。1．上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室(上海，201203)2．三峡大学医学院中医系中医基础教研室3．美国科罗拉多大学医学院摘要目的：观察不同中医治法对肝癌大鼠TKT(转酮酶)基因表达的调控差异，以及TKT基因在人肝癌细胞增殖中的作用。方法：①采用DEN(二乙基亚硝胺)诱发大鼠肝癌，分别经健脾理

2、气、清热解毒、活血化瘀等中药治疗后，Affymetrixrat230A基因芯片检测大鼠肝癌组织TKT基因表达的差异；②设计3个人TKT基因siRNA(小干扰RNA)序列，将siRNA经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株，MTF(噻唑蓝)比色法检测细胞生长增殖情况、RTqPCR(实时荧光定量聚合酶链反应)检测该基因的表达差异。结果：①芯片结果显示，TKT基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加，不同中药对其具有不同程度的下调作用，其中健脾理气法下调作用较明显；②采用MTY比色法筛选到1个TKT基因RNAi(RNA干扰)有效靶序列，转染48

3、小时后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比，P<0．O1)；③RTqPCR检测表明，转染48小时后该基因的表达明显降低。结论：TKT基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关，而中药健脾理气治法对其具有下调作用。关键词肝癌；转酮酶；基因芯片；RNA干扰；治法RNAidetectthefunction0fTKTgeneinmalignantproliferationoftumorcellslineSMMC-7721LIANGCHAO，FANGZHAO—QINL。HUWEr，WUZHONG—HUAL，GAOBI-FENG31．Basi

4、cMedicalSchool；ShanghaiUni—versityofTraditionalChineseMedicine(Shanghai，201203)China2．Schoolofmedicine；SanXiangUniversity3．MedicialCollegeofColorodaStateUniversity；Denver；AmericanAbstractObjective：TocomparethedifferenteffectsofseveralcommontraditionalChinesemedicine(TCM

5、)formulatherapiesontheexpressionof(Tansketolase)TKT，anddiscussprimarilythebiologicalfunctionsofTKTinhepatocarcinomacells．Methods：①Rathepatocellularcarcinoma(HCC)modelswereinducedbydiethylnitrosamine(DEN)，thedifferentex—pressionofTKTgeneweredeterminedbygenechipscausedbyd

6、iferenttherapeuticalmethodsincludingNourishingspleenandEnrichingqi、Cleatingawayheatandtoxicmaterial、Activatingbloodcirculation．~)ThreesiRNAtargetstowardTKTgeneweredesignedandtransfectedtoHCCcelllineSMMC-7721，thegeneexpressionofTKTweredeterminedusingreal—timequantitative

7、PCR，andthecellviabilityweredeterminedbyMTFassay．Results：①Accordingtothegenechipresults，theexpressionofTKTincreasedsignificantlyafterformationofHCC，severalTCMtherapeuticalmethodshaddifferenteffections，anddown—regu—latingofnourishingspleenandenrichingqiprescriptionwasobiv

8、ious．(AnefectivesiRNAtargetsequenceinTKTwasgot，thegeneexpressiondecreasedgreatlyatthe48houraftertransfected．~M