foxp1和yap基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文题目FOXP1和YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的___________________作用研究__________________研究生姓名_________________张素青_______________指导教师姓名_____________李德春（教授)___________专业名称___________外科学（普通外科)_________研究方向_______________肝胆胰疾病_____________论文提交日期2015年3月FOXP1和

2、YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究中文摘要IFOXP1和YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究中文摘要IFOXP1和YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究中文摘要FOXP1和YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究中文摘要背景肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)(简称肝癌)大部分患者发现时已是晚期，失去了最佳手术时机，经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)是目前主要方法，但易致肿瘤的复发与转移。原因是化疗导致耐药基因的水平升高，抑癌基因的水平降低，从而导致了肿瘤耐

3、药性的产生。基于与这些致癌属性相关的癌基因而设计的分子靶向药物在肝癌治疗中极具发展前景。研究表明FOX家族可以促进肝癌细胞的增殖，但机制尚不清楚。YAP是Hippo信号转导通路下游的效应因子，是重要的癌基因,YAP与肿瘤细胞的增殖和凋亡具有密切的关系，参与肝癌的形成和发展，前期研究发现FOXP1和YAP在肝癌组织中高表达，FOXP1和Yes-AssociatedProtein（YAP）分别与HCC的发生发展及预后相关，但是二者在肝癌的发生发展中的关系一直没有探讨。本研究的目的是探讨Hippo-YAP信号通路中

4、肝癌相关癌基因FOXP1和YAP在肝癌细胞增殖中的作用，以及以FOXP1-Hippo-YAP作为干预靶标在肝癌分子靶向治疗中的潜在价值。第一部分FoxP1和YAP基因在肝癌组织及TACE治疗后肝癌组织中的表达目的:用肝癌的基因芯片检测结果筛选差异表达基因，发现FoxP1和YAP两基因在肝癌中的表达情况；经TACE后再手术患者组织中FOXP1和YAP表达水平，观察FOXP1和YAP对肝癌生长能力、侵袭能力、耐药性是否产生影响，二者之间的关系。方法:用免疫组化（IHC）和免疫印迹（WB）检测FoxP1蛋白表达，用

5、qPCR检测FoxP1mRNA的表达。用realtimeqPCR和westernblot探讨对20例肝癌组织及癌旁组织和20例经DDP介入治疗再手术的肝癌及癌旁组织中FOXP1和YAP基因表达水平。结果：在肝癌组织中FOXP1mRNA和蛋白表达高于癌旁组织表达,FOXP1在肝癌细胞中的表达与肿瘤大小、血清AFP升高、肿瘤TNM分期显著相关。YAP在肝I中文摘要FOXP1和YAP基因在肝细胞肝癌细胞增殖中的作用研究癌中过表达高达62%，而癌旁组织中YAP表达水平极低（9%），而FOXP1在肝癌中过表达高达70.

6、18%，而癌旁组织中FOXP1表达水平低（34.58%），FOXP1与YAP蛋白在人肝癌组织中表达的平均光密度值散点图显示，两者呈正相关性，并经Pearson相关性分析(r=0.60,P<0.0001)。结论:YAP在肝癌中过表达高达62%，而癌旁组织中YAP表达水平极低（9%），而FOXP1在肝癌中过表达高达70.18%，而癌旁组织中FOXP1表达水平低（34.58%），二者表达异常与肝癌的发生、发展密切相关。FOXP1在肝癌患者中高表达和区域淋巴结转移一样看做为患者预后的判断指标。实验证实在肝癌细胞中抑制

7、内源性YAP和FOXP1表达可以抑制细胞增殖、诱导细胞对化疗药物的敏感性增强、细胞凋亡增多，这表明将FOXP1-Hippo-YAP作为干预靶点具有一定的研究价值。第二部分siRNA敲减YAP基因表达对人肝癌细胞增殖和药效影响目的：研究小片段干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）抑制肝癌细胞株中Yes-AssociatedProtein（YAP）表达后从而提高肝癌细胞株对阿霉素（adriamycin，ADM）的化疗敏感性。TM方法：根据YAP基因设计siRNA序列，利用脂质体Lipof

8、ectamine2000以siRNA转染4株肝癌细胞株PLC/PRF/5、Huh-7、MHCC97H、MHCC97L，通过荧光显微镜观察及采用蛋白免疫印迹（Westernblotting）法检测肝癌细胞株中YAP的表达。将细胞以不同浓度的ADM作用后，采用四甲基偶氮唑蓝（methylthialzolyltetrazolium，MTT）比色法检测细胞生长的存活率。结果结果：结果：：：成功地构建针对YA