trpc6在pdgf诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

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1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2013，29(12)：2229-2234·2229·[文章编号]1000—4718(2013)12．2229．06TRPC6在PDGF诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用成莹，曾欣，许继德，岳喜磊，韩志远，杨春涛(广州医科大学生理学教研室，广东广州510182)[摘要]目的：探讨经典瞬时受体电位通道6(TRPC6)对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响。方法：组织贴块联合酶消化法培养原代大鼠ASMCs。间接免疫荧光法鉴定平滑肌细胞及检测T

2、RPC6在ASMCs上的表达。CCK-8法检测PDGF诱导ASMCs的增殖。Rea1．timePCR检测PDGF作用后TRPC6mRNA的表达。Westernblotting检测PDGF作用后TRPC6蛋白的表达。CCK一8法检测TRPC6阻断剂对PDGF诱导ASMCs增殖的作用。结果：细胞免疫荧光显示：TRPC6广泛存在于气道平滑肌细胞。CCK．8法检测细胞的增殖发现，2OLPDGF作用后ASMCs发生增殖(P<0．05)；PDGF与TRPC6阻断剂SKF96365共同作用于ASMCs，ASMCs的增殖较单独使用PDGF组减弱(P<0．05)，且减弱的

3、程度具有剂量及时间依赖性。Rea1．timePCR结果显示：PDGF分别作用于ASMCs12h、24h和48h后，TRPC6mRNA表达与相应的对照组比较明显升高(P<0．05)。Westernblotting检测结果显示：PDGF分别作用ASMCs24h和48h后，TRPC6蛋白表达与相应的对照组比较明显升高(P<0．05)。结论：TRPC6参与了PDGF诱导ASMCs增殖的过程，PDGF促进ASMCs增殖可能与其上调TRPC6mRNA和蛋白表达相关。[关键词]血小板源性生长因子；气道平滑肌细胞；瞬时受体电位通道6；气道重塑[中图分类号]R332；R5

4、62．25[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．12．018EfectofTRPC6onPDGF．inducedproliferationofratairwaysmoothmusclecellsCHENGYing，ZENGXin，XUJi—de，YUEXi．1ei，HANZhi—yuan，YANGChun．tao(DepartmentofPhysiology，GuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510182，China．E—mail：xufide@163．con)[ABST

5、RACT]AIM：Toinvestigatetheroleofcanonicaltransientreceptorpotentialchannel6(TRPC6)intheproliferationofairwaysmoothmusclecells(ASMCs)inducedbyplatelet-derivedgrowthfactor(PDGF)．METHODS：RatASMCswereculturedbyenzymedigestionandtissueadhesion．Themethodofindirectwasappliedtoidentifythe

6、ASMCsandtodetecttheexpressionofTRPC6inASMCs．TheproliferationofASMCswasdeterminedbyCCK-8assay．ThemRNAexpressionofTRPC6wastestedbyreal—timePCR．TheproteinexpressionofTRPC6wasana—lyzedbyWesternblotting．TheinfluenceofTRPC6blockeratdifferentconcentrationsontheproliferationofASMCswasmea

7、suredbyCCK．8assay．RESULTS：TheresultsofimmunofluorescenceindicatedthatTRPC6expressioninASMCswaspositive．PDGFatconcentrationof20LinducedtheproliferationofASMCscomparedwithcontrolgroup(P<0．05)．WhenASMCsweretreatedwithbothPDGFanddiferentconcentrationsofTRPC6blockerSKF96365，theprolife

8、rationofASMCswasattenuatedindose．depende