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《气相色谱鉴别食品微生物的初步研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第卷第期宁波大学学报年月气相色谱鉴别食品微生物的初步研究汤丹剑宁波大学食品科学与工程系摘要用全细胞水介皂化及甲醋法的方法,通过气相色谱仪检测了几株食品微生物细胞长链脂肪酸构成。结果表明在食品微生物领域中,利用细胞脂肪酸差异性进行菌种的快速鉴别是可行的,其鉴定结果与传统鉴别的结果相符。关键词鉴别食品微生物气相色谱引言传统的细菌分类鉴定是基于微生物形态学特征、营养需求情况、生理生化反应以及血清学试验等方法进行的,是一种费时、费力,且需大量生化试剂、药品及器皿的方法。寻找一种快速有效的细菌鉴定新方法一直是国内外微生物学者孜孜不倦追求的目标。在
2、食品微生物领域中,对一些引起食品腐败变质、致病的细菌进行快速的确认,更具现实意义。据报道’台湾食品工业发展研究所已拥有脂肪酸图谱自动鉴定系统、指纹图鉴定系统和鉴定系统,对食品微生物进行快速鉴定。微生物细胞的化学成份在菌体内的存在均具一定的规律性。对它们进行检测、分析、比较,其结果往往可作为微生物鉴定的依据。由于脂肪酸几乎存在于所有细菌之中,相对含量较高,又是微生物组份中一种比较稳定的重要成份、从色谱技术上看,微量脂肪酸的测定方法简单、成熟,检测速度也快,所以众多的学者注重从微生物全细胞脂肪酸成份的差异性人手来对菌进行快速鉴定和分类。本文
3、对食品中常见的几株细菌的细胞脂肪酸成份进行了检测及差异性分析。提出了在食品微生物领域中,利用细胞脂肪酸差异性进行菌种快速鉴定、分类的可实行性。并对分离得到的一株乳酸菌按脂肪酸成份进行鉴定,其结果与传统分类鉴定方法所得的结果相符。材料与方法试验菌种均为实验室保存菌种。为市售酸奶中分离得到的一株杆菌试验菌种列于表年月日收到汤丹剑气相色谱鉴别食品微生物的初步研究表供试菌种表·占占“,,保加利亚乳杆菌山大肠杆菌肠,·占。,。,￡。“干酪乳杆菌切金黄色葡萄球菌卿。枯草芽抱杆菌’嗜酸乳杆菌切蜡状芽抱杆菌,。。二盯待鉴定主要试剂无菌生理盐水三氯甲烷一
4、己烷·分别熏蒸后,按比例配制。氢氧化钠一甲醇溶液·将氢氧化钠溶于甲醇水溶液中。无水硫酸钠·氢氧化钠饱和溶液·三氟化硼一乙醚一甲醇液将的三氟化硼一乙醚约,通人已熏蒸的无水甲醇中。盐酸·高级脂肪酸标准样均为色谱纯正十二烷酸正十四烷酸正十五烷酸正十六烷酸正十七烷酸正十八烷酸十八碳烯酸十八碳二烯酸正十九烷酸正二十烷酸培养基仪器气相色谱仪及数据处理机型色一质联用仪美国日色谱柱固定液为交联甲基硅酮一小内径液膜厚度书长度型离心沉淀机一恒温培养箱方法菌体的培养及富集各菌株在其最适生长温度下,在琼脂平板上进行培养乳酸菌采用厌氧培养培养时间均为。平板上生长
5、的菌苔以无菌生理盐水洗脱收集。在转速下离心沉淀。经儿次以生理盐水洗涤及再离心,得到纯净分析菌休。对致病菌,收集后进行加热灭菌处理。菌体细胞脂肪酸甲醋样品的制备细胞脂肪酸的抽取,,℃一菌体移人氢氧化钠一甲醇溶液中。一,。下回流反应约冷却后用三氯甲烷己烷抽取皂化液抽取有机杂质水相用盐酸调值至左右,再用无水饱和有利于快速、有效抽取脂肪酸,防止抽,。一,取过程中形成乳浊液而使分层难以进行用三氯甲烷己烷抽取脂肪酸有机相蒸发至干。宁波大学学报脂肪酸甲醋样品的制备标准脂肪酸样及抽取得到的细胞脂肪酸样品中,加人三氟化硼一乙醚一甲醇溶液,℃下回流反应约,
6、反应物移人已装有饱和氯,、,,。,化钠的分液漏斗中静置分层放弃水相有机相浓缩至一闪移人安培瓶中热封口冷藏备用。脂肪酸甲醋色谱检测在色谱仪上,按下述测试条件进行样品检测载气压力载气流量氧气压力门氧气流量氢气压力氢气流量分流口氮气流量分流比辅助气压力,口辅助气流量进样温度℃一进样量氢火焰检测器温度℃】℃一一采用二级程序升温公式℃℃脂肪酸甲醋的定性及定量分析定性分析卜用标准样定性用相对保留时间作色谱峰定性的依据,以十四烷酸为基准物质。。,,‘心一一相对保留时间被测组份的绝对保留时间值‘基准物在同一色谱条件下,测得的保留时间值一一色质联用定性对
7、成份复杂的一株乳酸菌脂肪酸甲醋样品用色质联用技术进行峰的定性。以确定样品处理方法的可信性。定量分析采用峰高百分数作为半定量结果的依据菌的常规分离及初步鉴定菌的分离将市售酸奶,,以无菌方式挑取一环在乳酸菌选择性培养基上划线分离挑取单菌落作进一步纯化。菌的‘常规鉴定最适生长温度的确定光密度法凝乳试验单菌落接种于灭菌乳中,在最适生长温度下进行培养,观察凝乳现象。、,菌种形态观察观察菌株的个体形态菌落特征以及在液体培养基中的生长情况。生化试验将菌种接种于含不同糖的培养基中,用澳甲酚紫作指示剂,观察糖的利用情况。结果与讨论脂肪酸标准样定性结果脂肪
8、酸标准样经甲醋化后,按上述色谱条件测得的绝对、相对保留时间见表。一乳酸菌株的定性结果汤丹剑气相色谱鉴别食品微生物的初步研究为证实样品处理及色谱检测方法的正确性,我们对一株典型的乳酸菌菌株的全细胞脂,。一肪酸
