银杏内酯b对缺氧环境下大鼠血管平滑肌细胞线粒体钙离子浓度的影响

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1、·44·InfectInflammRep，Vo1．11，No．1，March2010·论著·银杏内酯B对缺氧环境下大鼠血管平滑肌细胞线粒体钙离子浓度的影响于力方王珊李宁廖杰(解放军总医院医学实验测试中心，北京100853)【摘要】目的：探讨银杏内酯B对缺氧环境下大鼠血管平滑肌细胞线粒体内钙离子浓度的调节机制。方法：体外培养大鼠血管平滑肌细胞，分为正常对照组(细胞正常培养)、缺氧处理组(细胞在氮气中培养12h)和1、5、10ttmol／L银杏内酯B保护组(细胞加入不同浓度的银杏内酯B后在氮气中培养12h)。细胞经荧光探针Rhod一2／AM染色，激光共聚焦扫描显微镜下观察，并计算各组面积积分吸光度

2、值，以此反映线粒体浓度的变化。结果：与正常对照组比较，缺氧造成大鼠血管平滑肌细胞线粒体钙离子浓度显著升高，各银杏内酯B保护组细胞线粒体钙离子浓度明显低于缺氧处理组，且随着银杏内酯B浓度的升高，线粒体钙离子浓度呈下降趋势。结论：银杏内酯B可以维持线粒体内钙离子浓度的稳定，降低缺氧对细胞造成的损伤。关键词银杏内酯B缺氧平滑肌细胞线粒体钙EffectsofGinkgolideBonmitoehondrialcalciumlevelsinvascularsmoothmusclecellsathypoxicconditioninratYuLifang，WangShan，LiNing，eta1．Medic

3、alExperimentandAnalysisCenter，GeneralHospitalofPLA，Beijing100853，ChinaAbstractObjective：Toinvestigatethemechanismofchangesinmitochondrialcalciuminvascularsmoothmus—clecellsathypoxicconditionandeffectsofGinkgolideBonthechangeinrats．Methods：Ratvascularsmoothmus—clecellswereculturedinvitroandweredivide

4、dinto3groups：normalgroup，inwhichcellswereculturednormally；hypoxiamodelgroup，inwhichcellswereculturedfor12hoursinN2；andGinkgolideBtreatmentgroup，inwhichcellswereculturedwith1，5，10b~mol／IGinkgolideBfor12hoursinN2．SmoothmusclecellswerestainedwithRhod-2／AMandobservedwithlaserscaningconfocalmicroscope，an

5、dtheareaintegralopticaldensitywasrecor—dedtoexpressthemitochondrialcalciumleve1．Results：Mitochondrialcalciumlevelinhypoxiagroupwassignifi—cantlyhigherthanthatinnormalgroup，butitwassignificantlyreducedintheGinkgolideBtreatmentgroup，andshowingadecreasingtrendwithanincreaseinGinkgolideBconcentration．Co

6、nclusion：GinkgolideBcanreducetheinjuryofhypoxiaandmaintainmitochondrialcalciumonasteadylevelinvascularsmoothmusclecellsinrat．KeywordsGinkgolideBHypoxiaSmoothmusclecellMitochondrialcalcium线粒体是细胞内钙离子的储存库和调节器_】]，1材料与方法线粒体内、外膜之间的钙离子通道及线粒体膜上的转运蛋白可以维持线粒体内钙离子浓度的稳定l_2]。1．1大鼠血管平滑肌细胞(USMC)的培养将1×在缺氧和其他外界诱导因素的作

7、用下，线粒体跨膜10／ml的USMC细胞(军事医学科学院十所赠送)电位发生改变，造成线粒体膜通透性增加并引起线2ml接种于激光共聚焦显微镜专用薄底培养皿中，培粒体外钙离子大量内流_3]。钙离子的持续内流使得养基使用RPMI1640(Sigma)~l1人1O胎牛血清(Sigma线粒体肿胀坏死，细胞受损。银杏内酯B是银杏叶公司，美国)，37℃、5c02培养24h备用。提取物中的主要活性成分之一，具有多