针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的影响.pdf

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1、第32卷第4期天津中医药大学学报Vo1．32No．42013年12月JournalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicineDec．2013针刺对陕速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的影响术郝婷婷，付于，邢菁，郭睿婧，刘宇婧摘要：旧的]探讨针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的调节。【方法】运用快速老化鼠SAMP8和正常老化鼠SAMR1作为实验对象，采用“三焦针法”(原“益气调血，扶本培元”针法)，应用荧光指示剂及荧光探针标记，观察针刺对小鼠皮层、海马线粒体钙离子浓度以及活性氧簇含量的影响。【结果】SAMP8对照组皮层、海马线

2、粒体钙离子浓度和活性氧簇与正常对照组相比，表达上调；针刺组表达下调并趋向正常组；非穴组表达上调，与针刺组有显著差异。【结论】针刺能明显抑制线粒体内钙离子的蓄积，减少氧自由基的产生。非穴位的针刺在一定程度上会对机体产生不良刺激，加速氧化损伤。关键词：阿尔茨海默病；针刺；线粒体；活性氧簇；钙离子中图分类号：R749．16文献标识码：A文章编号：1673—9043(2013)04—0217—04阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经系统退行SAMP8和正常老化鼠SAMR1作为实验对象。随机性疾病，临床早期表现主要为患者认知功能、记忆分为SAMP8穴位针刺组、SAMP8非穴位针刺组、力的减退和生

3、活自理能力的下降，晚期出现精神状SAMP8空白对照组、SAMR1正常对照组，全部选取况，智力严重衰退，生活完全不能自理。该病具有起雄性小鼠。所有实验动物都在统一的生活环境和饮病隐袭、致残率高、持续性智能衰退而无缓解的特食条件下饲养，体质量20～25g，室温控制在20～25℃，点，严重危害老年人的健康和生活质量。其主要病每笼4只小鼠，每周更换鼠笼1次，给予足够的光理改变为AB诱导的氧化应激和线粒体的功能障照、饲料和水，以排除饮食及环境等所有可能对实碍，导致细胞凋亡。研究表明，线粒体功能障碍在验结果产生影响的因素。AD的疾病发生发展过程中发挥了重要作用【¨。临床1．2穴位选择和针刺方法针

4、刺组采用“益气调实践发现，“三焦针法”(原“益气调血，扶本培元”针血，扶本培元”针法进行针刺，取穴为膻中、中脘、气法)治疗AD疗效显著，揭示针刺可以改善老年性痴海、双侧血海和双侧足三里，穴位定位参照《实验针呆[21。本研究选用快速老化鼠SAMP8为研究对象，灸学》。膻中，针尖向上平刺，针刺2～3mm；中脘，直以正常老化鼠SAMR1为对照，从线粒体钙离子和刺5mm；气海，直刺5mm；双侧足三里，直刺2mm；活性氧簇浓度的角度探讨AD老化机制，并研究“三双侧血海，针尖向股内侧斜刺，进针2mm，上穴分焦针法”改善线粒体功能的部分作用机制。别施幅度(90～180。)频率(60—120r／mi

5、n)捻转法1材料和方法3O秒。非穴位针刺组，取双胁下两个固定非穴位点，1．1动物及分组此次实验采用天津中医药大学施幅度(90180。)频率(60～120r／min)捻转法105秒。第一附属医院实验动物中心提供的快速老化鼠SAMR1和SAMP8对照组行相同程度的捉抓刺激201秒。以上各组均每日治疗1次，持续30d，第$基金项目：国家自然科学基金面上项目(81173414)；天津市7天休息1次。高校科技发展项目(20090220)；高等学校博士学1．3线粒体钙离子浓度的测定将小鼠脱颈椎处科点专项科研基金(20101210120006)。死，剪开天灵盖，剥离海马和皮层，提取线粒体，在作者单

6、位：300193天津中医药大学(郝婷婷，郭睿婧，刘宇婧)纯化好的线粒体里加入荧光钙指示剂Calcium300193天津中医药大学第一附属医院(付于)Green5N(Invitrogen公司)，放入96孑L板，避光振荡150009黑龙江中医药大学附属第二医院(邢菁)孵育30min后，即刻用荧光分光光度计检测(激发作者简介：郝婷婷(1986一)，女，硕士研究生，研究方向为针波长506nm，散发波长531rim)。计算小鼠脑皮层灸抗衰老。2l7第32卷第4期天津中医药大学学报VoI．32No．42013年12月JournalofTianjinUniversityofTraditionalC

7、hineseMedicineDec．2013海马中，SAMP8对照组较SAMR1正常对照组，活性蓄积，反而产生不良效果，使得钙离子超载，引起线氧簇表达有上调的趋势(P>0．05)；针刺组的活性氧粒体损伤。簇表达下调，与SAMP8对照组无显著差异(0．O5)，许多神经系统退行性疾病的发生和发展主要与SAMR1正常对照组无显著差异(P>0．05)，非穴是因为氧化应激及其引发的线粒体功能失调所导组活性氧簇表达上调，与针刺组和SAMR1正常对致的。氧化应激是指体内