纳豆菌脂肽对分离于对虾养殖环境中产T-2毒素镰孢茵抑制效应的研究-论文.pdf

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1、第37卷第5期水产学报VO1．37．No．52013年5月JOURNALOFFISHERIESOFCHINAMay，2013文章编号：1000—0615(2013)05—0784—06DOI：10．3724／SP．J．1231．2013．38297纳豆菌脂肽对分离于对虾养殖环境中产T-2毒素镰孢茵抑制效应的研究刘唤明，王雅玲，孙力军，徐德峰，施琦，廖建萌，励建荣(1．广东海洋大学食品科技学院，广东省水产品加工与安全重点实验室，广东普通高等学校水产品深加工重点实验室，广东湛江524088；2．湛江市质量计量监督检测所，广东湛江524022；3．浙江工商

2、大学食品科学与生物工程学院，浙江杭州310035；4．渤海大学辽宁省食品安全重点实验室，辽宁锦州121013)摘要：为了探明纳豆菌脂肽对对虾养殖环境中的产T-2毒素镰孢菌分离株的控制效应，实验采用扫描电镜观察了镰孢菌孢子超微结构、普通显微镜观察了菌丝形态、荧光显微镜观察了菌丝通透性。结果显示，脂肽浓度为1mg／mL时，脂肽对镰孢菌孢子萌发的抑制率达78．8％，镰孢菌培养到第3天的生物量为不加脂肽对照的24．5％。扫描电镜观察结果表明，1mg／mL的脂肽可以使镰孢菌的孢子呈念珠状；普通显微镜观察结果显示，1mg／mL脂肽处理能使菌丝隔膜消失；荧光显微镜

3、观察结果表明，脂肽能增加镰孢菌菌丝细胞膜的通透性。关键词：镰孢菌；纳豆菌；脂肽；抑菌中图分类号：S943文献标志码：A镰孢菌属为半知菌亚门，丝孢纲，是一类数量类组成。脂肽具有强抗真菌活性，目前已经运用大、种类繁多，适应世界各地环境的霉菌，兼寄生或于许多真菌的防治。本研究组前期的研究已腐生生活，是真菌中较大的一属。寄生于对虾上的从纳豆中分离筛选出了一株纳豆芽孢菌杆菌NT一镰孢菌，1966年首次在El本冈山水产实验所养殖6菌株，该菌可以产生surfactin、iturin、fengycin三的日本对虾(Litopenaeusjaponicus)上发现，以

4、类脂肽类物质“。后随着世界养虾业的迅速发展，已在白对虾镰孢菌的很多种类可以产生真菌毒素，人畜(Penaeussetifer“)，凡纳滨对虾(Penaeus食用被污染的食物后会造成食物中毒甚至死亡。vannamei)，加州对虾(Penaeuscaliforniensis)等多单端孢霉烯毒素是镰孢菌产生的最重要、数量最种对虾上发现，成为继对虾链壶菌病、离壶菌病和多的毒素，T一2毒素是单端孢霉烯毒素中最重要海壶菌病后危害最大的真菌性疾病。孙颖峰的一种。目前还没有对虾养殖环境中的镰孢菌能等研究表明，对虾养殖环境存在一定浓度的镰孢产生T一2毒素的研究报道。本研

5、究组前期的研究菌，对对虾养殖存在潜在危险，因此研究控制对虾已从对虾养殖环境中筛选出了梨孢镰孢菌、串珠养殖环境中的镰孢菌的无公害制剂十分必要。镰孢菌等镰孢菌。本实验在此基础上进一步脂肽是枯草芽孢杆菌、淀粉液化芽孢菌筛选出能产生T一2毒素的镰孢菌，并研究纳豆菌杆、苏云金芽孢杆菌等分泌的一类由亲水性脂肽对其的抑菌效应及抑菌机理，以期为纳豆菌环状短肽头部和长链疏水性脂肪酸尾巴组成的双脂肽用来控制对虾养殖环境中的产T一2毒素镰孢亲性化合物，主要由surfactin、iturin、fengycin三大菌提供基础。收稿日期：2012_08—14修回日期：2012—

6、12—17资助项目：国家自然科学基金项目(31171634；30972287)；“十二五”国家支撑计划项目(2012BAD29B06)；湛江市科技计划项目(2011D02)通信作者：王雅玲，E-mail：wangylchina@163．com；孙力军，E-mail：suncamt@126．comhttp：／／WWW．scxuebao．cn5期刘唤明，等：纳豆菌脂肽对分离于对虾养殖环境中产T一2毒素镰孢菌抑制效应的研究785质谱扫描模式：ESI(+)；喷雾器电压为41材料与方法500V；鞘气压力为25au；辅助气压为5a；毛细1．1菌株管温度为270℃

7、；碰撞压为1．5reTort。纳豆菌NT6(BacillussubtilisNatto)，广东海1．4纳豆菌脂肽的制备洋大学食品科技学院海洋有害微生物及毒素绿色取斜面保存的BacillusnattoNT一6菌株，接种控制研究室保存，经生理生化16SrDNA鉴定于LB液体培养基中，于37℃、150r／min条件(GenBank登录号为JN180628)。下，恒温摇床振摇培养24h作为种子液。按照镰孢菌Fw1102—1、Fsl101—3、Fsl101-7、5％接种量接种于改良的Landy培养基，于33℃、Ff2101—1、Ff3102-4均广东海洋大学食

8、品科技学180r／min培养38h。5000r／rain离心15min除院海洋有害微生物及毒素绿色控制研究室