纳豆菌糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究-论文.pdf

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1、2013，Vo1．30，No．5药物研究纳豆茵糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究张丽妍，郝敏，李秋莎(1．大连市第三人民医院，辽宁大连116091；2．大连周水子国际机场医院，辽宁大连116033)[摘要]目的：通过对纳豆菌糖苷酶的酶学性质研究，获得其适宜条件，为其各方面研究应用提供理论基础。方法：根据不同蛋白质分子理化和生物学性质差异，应用SDS—PAGE凝胶电泳技术和DEAE-celluloseDE一52柱分离方法建立纳豆菌糖苷酶的分离纯化方法，确定相对分子量；以酶活力为指标研究其酶学性质。结果：纳豆菌糖苷酶的相对分子质量约为65．6kDa。最适温度为4

2、0℃，最适pH为5，在20℃～40℃、pH5～7、低金属离子浓度条件下稳定性较好；金属离子浓度达到5mmol·L时Na、K、Ca对酶有激活作用，Mn“、Cu对酶有抑制作用。结论：纳豆菌糖苷酶的热稳定性较好；对较强酸碱性环境敏感，耐受性较差；较高浓度金属离子对该酶有明显激活或抑制作用。[关键词]纳豆菌；糖苷酶；分离纯化；酶学[中图分类号]R282．71；R284．2[文献标识码]A[文章编号]2095—3593(2013)05—0265—04PurificationandEnzymologicalPropertiesofNattoFungusGlycosi

3、daseZHANGLi—yan，HAOMin，LIQiu．sha(1．TheThirdPeople'sHospitalofDalian，LiaoningDalian116091；2．HospitalofDalianZhoushuiziInternationalAirport，LiaoningDalian116033)[Abstract]Objective：TodetermineenzymologicalpropertiesofNattoFungusGlycosidase，andobtainitsappropriateconditions，pro．vidi

4、ngtheoreticalbasisforitsvariousaspectsresearchapplications．Methods：Accordingtodifferentphysicalandchemicalorbiologicalpropertiesofproteinmolecules，topurifiyNattoFungusGlycosidaseanddeterminetherelativemolecularweight，bySDS—PAGEgelelec—trophoresistechnologyandDEAE—celluloseDE_52co

5、lumnseparation．Inenzymeactivityasanindextostudytheenzymologicalproperties．Results：TherelativemolecularweightofNattoFungusGlycosidaseisabout65．6kDa．Theresultsshowedthat，theoptimalactiontemperatureofglycosidaseis40℃，theoptimumpHis5，itisstablebytemperaturewithin20℃to40℃andpHvaluewit

6、hin5to7．Itisalsostablewithalowconcentrationofmetalion．Conclusion：ThermalstabilityofNattoFungusGlycosidaseisgood；andsensitiveinstrongacidandalkalineenvironment，toleranceispoorer；ahighconcentrationmetalionisobviouslyontheenzymeactivationorinhibitoryaction．[KeyWords]Natto~ngus；Glyco

7、sidase；Separationandpurification；Eenzymology纳豆是大豆经枯草杆菌(纳豆菌)发酵而成的短等优点。B．葡萄糖苷酶的研究可以追溯到1837一种功能性食品。纳豆不仅具有独特的风味和丰年，Liebig和Wohler首次在苦杏仁中发现了该酶，富的营养，而且因具有多种保健功能J，被誉为从而使杏仁成为p一葡萄糖苷酶的经典来源。在后“超级健康食品”。纳豆的保健功能主要与其中的来的研究中发现，B．葡萄糖苷酶分布广泛，在植物纳豆激酶、异黄酮、皂青素、维生素K：等功能因子的种子和微生物中尤为普遍。近年来，科研工有关J。1987年，Et

8、本富崎医科大学须见洋行作者对B．葡萄糖苷酶的研究势头有增无减，，等首先发现纳豆激