纳豆激酶高活性菌株BN-05鉴定及发酵工艺优化-论文.pdf

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1、研究报告中国酿造2014年第33卷第1期总第263期·91·纳豆激酶高活性菌株BN一05鉴定及发酵工艺优化王常苏，孙晓彤：，余洁：，高冰z(1．武汉轻工大学生物与制药工程学院，湖北武汉430023；2．武汉鑫宏食品酿造科研所，湖北武汉430051)摘要：对分离的纳豆激酶高活性菌株BN．05进行了初步鉴定，并对其固态发酵产纳豆激酶的工艺条件进行了优化，旨在提高纳豆激酶的含量。通过形态和分子生物学鉴定BN．05为枯草芽孢杆菌属菌株，优化后发酵工艺参数：大豆破碎度为2，发酵温度为36℃，接种量为5．5％，葡萄糖添加量为2．5％。在优化条件下，BN一05通过固态发酵纳

2、豆激酶活力达到(4715．26．103．23)1U／g湿黄豆，比之前优化提高137％。关键词：枯草芽孢杆菌属；纳豆激酶；固态发酵；酶活力中图分类号：TS201．3文献标识码：A文章编号：0254—5071(2014)01—0091—05doi：10．3969~．issn．0254—5071．2014．01．021IdentificationofnattokinasehighactivitystrainBN-05andoptimizationofthefermentationtechnologyWANGChangsu，SUNXiaotong2，YUJie，GAO

3、Brag~f1．SchoolofBiologicalandPharmaceuticalEngineering,WuhanPolytechnicUnive~ity,Wuhan430023,China；2．XinhongInstituteofFoodandBrewing,Wuhan430051，china)Abstract：NattokinasehiglaactivitystrainBN·-05waspreliminarilyidentifiedandthenattokinaseprodutiontechnologywithsolid—-substrateferm

4、enta-tionwasoptimizedinordertoimprovethecontentofnattokinase．BN一05wasdeterminedasBacillussubtilisbymorphologicalandmolecularidenti-fication．Theoptimumconditionoftechnologywasas~llows：degreeofsoybcanfragmentation2，fermentationtemperature36~C，inoculum5．5％andglucoseaddition2．5％．Attheop

5、timizingconditions，theactivityofnattokinasefermentedbyBN·05couldreach(4715．26~103．23)1U／g(wetweight)，whichwas137％timesoftheformercultureconditions．Keywords：Bacillussubfilis；nattokinase；solid-substratefermentation；enzymeactivity血栓性疾病可导致心肌梗塞、脑血栓中风、急性肺原实验室保存。柱式细菌DNAout(细菌基因组抽提试剂盒)：性心脏病

6、等相关性疾病【”，因其发病率高、复病率高，而且北京天恩泽基因科技有限公司。难以根治，已成为威胁人类健康的主要疾病。因此，近几年1．1．2培养基来就如何有效的治愈血栓性疾病，引起了医学界、科技界初筛培养基：酪蛋白培养基，其组成为5g／L酪素，lg／L高度重视。纳豆激酶(nattokinase，NK)已被证明具有高效葡糖糖，I#L酵母膏，1eeLK2HPO，0．5g门LKH2PO，0．1eCL的溶栓作用[2-4]，其不仅可以直接降低纤维蛋白原，而且可MgSO4，pH7．0-7．2。以促进催化血纤维蛋白溶酶原转化为血纤维蛋白溶酶，斜面培养基：LB培养基，其组成为10

7、g门L蛋白胨，5g／L增加体内血栓溶解因子的合成[5-7]。相比临床上的溶栓药酵母提取物，10g／LNaC1，15g／L琼脂，pH7．0。物(尿激酶(urokinase，UK)、链激酶(streptokinase，SK)和液体种子培养基：10g／L~糖糖，5g／L酵母提取物，lOg／L组织型纤溶酶原激活剂(tissue．typeplasminogenactivator，牛肉膏，5g／L，pH7．4～7．6。t—PA)，纳豆激酶具有高效的溶纤活性、安全性好、生产成本固体发酵培养基：黄豆洗净，与水以1：5(w／v)的比例低、无毒副作用、半衰期长、在胃肠的稳定性好等

8、优点2】。混合。实验对筛选的纳豆激酶生