高活性纳豆激酶工艺改进研究 优先出版.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2017，45(10):93－94DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2017.10.030高活性纳豆激酶工艺改进研究张浩，王家林(青岛科技大学生物工程实验室，山东青岛266042)摘要［目的］优化高活性纳豆激酶的纳豆生产工艺条件。［方法］从市售纳豆产品中分离筛选出高活性的菌株作为试验菌株，采用固态发酵的方法制备纳豆，对影响纳豆激酶产量的主要因素浸泡时间、接种量、发酵时间等进行考察，研究高活性纳豆激酶的工艺条件。［结果］

2、利用对甲基苯磺酰L精氨酸甲酯(TAME)法测定纳豆激酶活性，确定最佳纳豆激酶酶活的纳豆生产工艺条件为浸泡时间8h、接种量10%、发酵时间48h。［结论］该研究可为高活性纳豆激酶的生产提供参考。关键词纳豆;纳豆激酶;活性测定;工艺优化中图分类号TQ925文献标识码A文章编号0517－6611(2017)10－0093－02StudyontheImprovementofHighActivityNattoKinaseZHANGHao，WANGJia-lin(BiologicalEngineeringLabof

3、QingdaoUniversityofScienceandTechnology，Qingdao，Shandong266042)Abstract［Objective］Tooptimizetheprocessconditionsofhighactivitynattokinase．［Method］Nattowasisolatedfromcommercialnattoprod-uctsandusedastheexperimentalstrain．Nattowaspreparedbysolid-stateferm

4、entation．Theprocessconditionsofhighactivitynattokinasewerestudied．Themainfactorsaffectingtheyieldofnattokinasewereasfollows:immersiontime，inoculationamountandfermentationtime．［Ｒesult］TheactivityofnattokinasewasdeterminedbyTAMEmethod．Theoptimumnattokinase

5、productionprocessconditionsweredeterminedas8hsoakingtime，10%inoculationamount，48hfermentationtime．［Conclusion］Thestudycanprovidereferenceforproductionofhighactivitynattokinase．KeywordsNatto;Nattokinase;Activitydetermination;Processoptimization纳豆是经过蒸煮的大豆在

6、纳豆芽孢杆菌的发酵作用下精氨酸和甲醇，高锰酸钾具有强氧化性，可以将甲醇氧化为［1］产生的发酵食品。纳豆含有多种生理活性物质，具有扩张甲醛，甲醛再与变色酸在沸水浴中发生显色反应，生成蓝紫［5］血管、溶解血栓、促进血液循环、抗癌、抗菌、抗氧化、延缓衰色复合物。该复合物颜色稳定，在574nm处有最大的吸老、预防骨质疏松、改善肠道环境等生理功能。纳豆激酶是光度，因此可以作为常规检测纳豆激酶酶活的方法。由纳豆芽孢杆菌分泌的具有溶栓作用的碱性丝氨酸蛋白1．2．1大豆浸泡时间对纳豆激酶酶活的影响。取4个试剂［2］酶，

7、是由275个氨基酸残基组成的单链多肽，属于胞外酶，瓶，分别加入10g大豆，按照豆水比为1∶2(g∶mL)的比例加其相对分子质量不大，具有溶解血栓的作用，并且在人体内入蒸馏水，盖上瓶塞进行浸泡并计时，浸泡时间依次为6、8、作用迅速、半衰期短，因此近年来受到世界各国医学界的广10、12h;浸泡完成后进行115℃高温灭菌30min;按照6%的泛关注。接种量依次接种芽孢杆菌，接种完后将瓶口封好并在外部该试验是在成品纳豆中提取纳豆芽孢杆菌，经过逐级放附上一层保鲜膜防止其在生化培养箱中水分蒸发，放入生化［6］大培养

8、后接种到高温蒸汽灭菌的黄豆中，通过改变浸泡时培养箱中39℃发酵48h，然后取出放入冰箱4℃保鲜层后［7］间、接种量、发酵时间、后熟时间等条件进行发酵培养。将纳熟24h;之后提取出纳豆激酶，采用TAME法测定其活性。豆碾碎后加生理盐水溶解，通过冷冻离心保留上清液，再经1．2．2发酵接种量对纳豆激酶酶活的影响。取6个试剂过2次硫酸铵沉淀分离提纯得到纳豆激酶粗酶，再利用pH瓶，分别加入10g大豆，按照豆水比为1∶2(g∶mL)的比例加［3］6．5